论文部分内容阅读
目的：现有的实验方法不能够准确地鉴别活动性和潜伏性结核人群,为了寻找更加有效的诊断策略来辅助结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test, TST)或者取代它,从而鉴别活动性和潜伏性结核,我们选择了结核分枝杆菌RD1区编码的蛋白ESAT6和CFP10以及在其缺氧的条件下产生的HspX,试图将ESAT6、 CFP10和HspX三个抗原联合诊断运用于鉴别活动性和潜伏性结核中。方法：收集临床上肺结核患者(28例)、患者的密切接触者(14例)以及健康体检大学生(11例)的外周血,共分四组：肺结核患者分为肺结核初治组(Initial treated-tuberculosis, IT-TB)、肺结核复治组(Retreated-tubercu-losis, RT-TB),密切接触组(Close contacts, CC,接触至少一年以上)和健康组(Healthy donors, HD)。ELISPOT技术检测不同人群在ESAT6、CFP1O和HspX分别刺激后分泌IFN-γ的T淋巴细胞数。ELISA技术检测血浆中的总IFN-γ浓度以及ESAT6、CFP10和HspX特异性IgG水平。结果：ESAT6、CFP10和IHspX体外分别刺激实验对象的外周血淋巴细胞,可使其分泌大量IFN-γ。与HD组和CC组相比,结核病患者的两组中,ESAT6和CFP10蛋白刺激的分泌IFN-γ的细胞数要明显更多(p＜0.05)。而结核特异性抗原HspX刺激后的结果显示,在HD组和CC组中,每3×105PBMCs中形成的斑点单位和结核病患者类似甚至多于结核病患者(p＞0.05)ESAT6、CFP10和IHspX分别包被96孔板用来检测四组人群血浆中的特异性IgG水平。在ESAT6包被的多个稀释度中,除了1：100稀释度外,CC组与IT-TB组或是RT-TB组相比OD值要低,结果有明显的统计学差异(p＜0.05)。在CFP10包被的实验里,四组的特异性IgG水平没有明显的不同。在HspX包被的实验里,CC组中吸光度值是高于其他组。在1：100的稀释度时,CC组的IgG水平明显高于HD组,IT-TB和RT-TB组。(p＜0.01)在1：800、1：1600、1：6400和1：12800四种稀释度中,CC与RT-TB相比结果有统计学差异。(p＜0.05)ELISA检测血浆中总的IFN-γ水平,HD组比RT-TB组分泌更高水平的IFN-γ且差异具有统计学意义。(p＜0.05)结论：各人群对ESAT6、CFPIO和HspX三种抗原表现出明显差异。在ELISPOT实验ESAT6和CFP10蛋白刺激组的结果,分泌IFN-γ的细胞数表现出比正常人高而HspX蛋白刺激的结果比正常人低。在ELISA实验ESAT6和CFP10蛋白组中,特异性IgG水平表现出比结核病患者低而HspX的结果比结核病患者高。因此,利用ELISPOT以及ELISA技术,使用这三种抗原联合可以对活动性和潜伏性结核进行初步筛选,可作为结核病患者有效的鉴别诊断策略候选。