背景对于肿瘤出芽（Tumor Budding,TB）这一概念,医学界早已给出了清晰且明确的界定,即在肿瘤浸润前缘存在的5个以下细胞的肿瘤细胞簇。相关研究证实,TB是结直肠癌中的一个独立预后因素,但当前还没有完全明确TB的形成机制以及其与肿瘤进展之间的作用情况,而且关于导致TB的分子标记的研究也较少。ZBTB7A是一种原癌基因,与肿瘤分级、患者预后等密切关联。作为钙粘蛋白-连环蛋白复合物中的一分子,CTNND1在细胞膜和细胞浆的不同定位会影响胃癌细胞的迁移浸润能力。对GAGE12I的运行机制及表征现象进行全面观察与深入研究后发现,它通过激活p38 δ/pMAPKAPK2/pHSP27通路来加快胃癌发展进程。而CREB1是极具代表性的一种转录因子,不仅在胃癌组织中高表达,还会随着肿瘤分期及预后不良等相关参数变化而发生相应改变。作为驱动蛋白家族不可或缺的一个重要成员,KIF26B的驱动机制主要体现在胃癌上,并且与肿瘤分级、远处转移及预后不良等相关因素表现为正关联。对此,在本课题中,笔者将目光聚焦于胃腺癌,利用获取到的胃腺癌样本着重分析TB与上述这几种促癌基因的是否存在关联,并深入探索相关标记与TB形成之间的机制。方法1.在山大学齐鲁医院选取符合要求的胃腺癌病例,并对相关临床资料进行系统化分类与归集。2.进行肿瘤出芽评分,并分析其与临床病理参数相关性。2名经验丰富的病理医师对所选病例HE切片重新阅片,在低倍镜下（40倍）选出5个热点区,并在每个热点区中随机选择一个200倍视野计数TB数量,以计算出的中位数为TB评分标准,采用当前颇受研究人员青睐与认可的Graphpad Prism 7和SPSS 20软件对TB与肿瘤分级、预后等相关参数之间的关系进行全面分析。3.进行免疫组织化学染色评分,分析其与肿瘤出芽评分的相关性。对先前染色的ZBTB7A、GAGE12I、CTNND1、KIF26B、CREB1免疫组织化学染色切片进行阅片,通过计算确定出肿瘤主体及浸润前沿各项指标评分后,再通过软件进行Spearman相关性分析,对各指标与TB间的关联性进行全面分析。4.细胞功能学与Western blotting实验。经干扰或过表达ZBTB7A后,通过细胞迁移和浸润实验来进一步确定过表达及敲低ZBTB7A后细胞功能是否会发生变化。完成上述操作后,利用Western blotting实验来探究ZBTB7A与上皮间叶转化标记物表达之间的影响机制。结果1.TB评分对淋巴结转移和生存期具有独立评估价值。具有淋巴结转移的患者的TB评分远高于无淋巴结转移的患者。ROC曲线表明TB是淋巴结转移的良好预测指标。具体来讲,TB评分越高,一般患者的总生存期就越短,并且TB评分还会反映肿瘤病理分级、淋巴结转移等相关情况。在肠型胃腺癌中,相较于阴性患者,淋巴结转移阳性患者的TB评分明显更高一些。2.ZBTB7A表达与TB评分呈正相关。在肠型胃腺癌中,肿瘤边缘的ZBTB7A表达评分会随着TB评分增高而相应增大。其中评分大于中位值的病例,ZBTB7A在肿瘤边缘或肿瘤内部表达评分更高,并且TB评分也比较高。同时,研究结果表明,CREB1、KIF26B、GAGE12I和CTNND1的免疫组化表达都与TB评分无显著相关性。3.TB评分与肿瘤边缘较高的ZBTB7A表达的相关性。在肠型胃腺癌中,肿瘤边缘ZBTB7A评分高于肿瘤内部ZBTB7A评分的部分病例比其他病例具有更高的TB评分,且预后更差。4.ZBTB7A通过增强EMT,促进TB的形成。在胃癌细胞中,敲低ZBTB7A能起到减缓迁移和浸润的作用,但过表达ZBTB7A却具有驱动效应。通过Western blotting实验结果分析发现,在过表达 ZBTB7A 时,N-cadherin、Vimentin、Snail 的表达明显,而 E-cadherin 的表达不显著。但在敲低ZBTB7A时却出现了截然相反的结果,即E-cadherin的表达显著,其他参数的表达下降。结论1.TB评分对胃腺癌淋巴结转移和生存期具有独立评估价值。2.肠型胃腺癌中,ZBTB7A表达与TB评分呈正相关。3.肠型胃腺癌中,肿瘤边缘ZBTB7A表达越高,其TB评分就越大,且预后更差。4.ZBTB7A通过改变上皮间叶转化标记物表达来促进TB形成,从而促使肿瘤细胞迁移和浸润。