论文部分内容阅读
本文研究的主要内容是围绕适用于生物大分子快速色谱分离的新型液相色谱介质的制备及其应用这一主题展开的。首先以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体, 双甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)为交联剂,采用固液联合致孔方式,通过一步悬浮聚合制备了一种新型双孔高分子球形载体。该介质既有10-90 nm小孔区又有180-4000 nm大孔区。经化学修饰后, 得到含二乙胺羟丙基的阴离子交换剂(介质A)。 优化了制备条件。并与用相同方法制备的但仅含有机溶剂致孔剂的介质B进行了比较。介质A和B均具有较高的静态吸附容量和机械强度。 由于介质A内含有流动相可以对流通过的大孔, 因此其动态吸附容量远高于介质B, 并且在较高的流速下表现出较好的色谱流动性能,并对蛋白质混合物有良好的分离效果。然后又将双孔微球与亚胺二乙酸(IDA)键合后,分别固定了Cu2+和Ni2+等过渡金属离子,制成了双孔型金属螯合亲和介质(IMAC)。比较了蛋白质在金属螯合柱上的保留特性。用Ni2+-IDA柱对四种模式蛋白的混合物及重组融合蛋白人白介素-11(His6-IL-11)进行了快速分离纯化。经SDS-PAGE电泳分析,经4min一步纯化后目标蛋白纯度为94.0%。最后又采用相同的高分子单体和交联剂及聚合方式,只用碳酸钙为固体致孔剂,合成了一种超大孔球形高分子聚合物分离介质。经功能基化后,成为超大孔型阴离子交换剂。这种超大孔球形介质含有8μm贯通式的大孔,比表面积为79.4m2/g。具有良好的流动性能和机械强度。在300-2400cm/h的流速范围内,超大孔介质填充柱对质粒DNA具有高的动态吸附容量(>1000μg/mL bed)。用2mL和20mL的超大孔介质填充柱分别对经碱裂解的质粒DNA粗品进行了色谱纯化,在较高的流速下皆取得了较好的分离效果。经琼脂糖凝胶电泳分析,分离所得的质粒确为5.4kb的pcDNA3, 质粒产品的纯度在95%左右,收率为75%。从而实现了基因治疗质粒载体的大规模快速分离纯化。