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目的:研究赖氨匹林(Aspisol)对人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7增殖、凋亡的调控作用,及对MDA-MB-231、MCF-7细胞内ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase)、p-ERK1/2(p-extracellular signal-regulated kinase)蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响,探讨Aspisol体外抗乳腺癌作用的机制。 方法:实验分为对照组、Aspisol(1、5、10 mmol/L)组、PD9805940μmol/L MEK(mitogen-activated protein kinase kinase)抑制剂组、PD9805940μmol/L联合Aspisol10 mmol/L组共六组。1、采用免疫细胞化学方法测定MDA-MB-231、MCF-7细胞的环氧合酶-2(COX-2)的表达。2、通过HE染色观察各组药物作用24h对MDA-MB-231、MCF-7细胞形态的影响;3、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率;4、流式细胞仪(flow cytometer, FCM)检测细胞凋亡率;5、MDA-MB-231、MCF-7细胞经各组药物作用于24 h后,蛋白质印迹(western blotting)法检测ERK1/2、p-ERK1/2和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。 结果:1、MCF-7细胞未检测到COX-2的表达,而MDA-MB-231细胞COX-2呈强表达,COX-2表达于细胞浆中,免疫细胞化学显色细胞胞浆呈棕黄色。2、HE染色光镜下见 Aspisol组细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。PD98059联合Aspisol组作用效果更明显。3、MTT结果显示1、5、10 mmol/L Aspisol可抑制MDA-MB-231、MCF-7细胞的生长,药物浓度越大,时间越长,抑制作用越明显,差异有显著性(P<0.01)。Aspisol10 mmol/L的浓度抑制率最大,在作用于MDA-MB-231细胞72小时后抑制率可达到(80.75±3.14)%,作用于MCF-7细胞72小时后抑制率可达到(69.54±3.26)%,提示MDA-MB-231细胞对Aspisol的抑制作用较MCF-7细胞敏感。PD98059与Aspisol合用抑制效果更明显,合用组与PD98059和Aspisol单独组差异有显著性(P<0.01)。4、Aspisol可诱导MDA-MB-231、MCF-7细胞发生凋亡。随着 Aspisol浓度的提高,凋亡率明显增高,差异有显著性(P<0.01)。10 mmol/L Aspisol组细胞凋亡率最高,其中MDA-MB-231细胞早期凋亡率达到(15.41±2.14)%,MCF-7细胞早期凋亡率为(11.40±3.56)%。PD98059与 Aspisol合用组的凋亡率高于 PD98059组和 Aspisol组,合用组与 PD98059和Aspisol单独组差异有统计学意义(P<0.01)。5、Aspisol对 MDA-MB-231、MCF-7细胞总ERK表达影响不明显(P>0.05),主要抑制ERK磷酸化,即下调p-ERK表达,且药物浓度越大,抑制作用越明显,差异有显著性(P<0.05)。合用组的p-ERK明显低于PD98059组和Aspisol组(P<0.05)。可见Aspisol和PD98059均可降低p-ERK的表达。6、Aspisol可下调MDA-MB-231、MCF-7细胞的Bcl-2蛋白的表达(P<0.05),上调Bax蛋白的表达(P<0.05),并且药物浓度越大,作用效果越明显。PD98059与Aspisol合用效果优于单独使用,合用组与PD98059和Aspisol单独组差异有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1、MCF-7细胞COX-2的表达为阴性,而MDA-MB-231细胞COX-2呈强表达; 2、Aspisol可诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7凋亡,抑制其生长和增殖; 3、Aspisol可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7的p-ERK的表达,但不影响总ERK的表达,同时下调Bcl-2、上调Bax的表达; 4、Aspisol抗乳腺癌的作用可能与ERK信号通路有关。