上皮性卵巢癌是女性生殖系统中死亡率最高的恶性肿瘤。该病起病比较隐匿,早期无明显症状,缺乏有效的早期诊断方法,往往在确诊时已发生转移。目前5年总体生存率仍徘徊在30%~40%左右,总体预后不满意。因此,探索与卵巢癌发生、发展及侵袭转移的相关因素尤其重要。mi RNA是一类全长约为22nt的非编码小分子单链RNA。大量研究表明,mi RNA的异常表达与多种疾病的发生、发展密切相关。许多mi RNA被证实在调节细胞生长、分化中起关键作用,近几年研究发现mi RNA也参与某些肿瘤的发生、发展和转移,作用类似于抑癌基因或癌基因。目前研究显示,mi R-181a与多种恶性肿瘤,如胃癌、乳腺癌、宫颈癌的发生发展有密切关联,但在上皮性卵巢癌中的研究较少。TGF-β是一类活性多肽家族。研究表明,TGF-β信号传导通路在多种恶性肿瘤中发挥重要作用。大量研究显示:TGF-β信号传导通路对不同发展时期的恶性肿瘤存在截然相反的不同作用。在肿瘤发生早期,以抑制效应为主,其主要表现在促进细胞分化和凋亡、促进白细胞聚集、抑制肿瘤性炎症和抑制基质细胞来源的分裂素的作用等方面。但是,在肿瘤的进展、侵袭阶段,TGF-β失去对肿瘤的监控抑制作用,反而促进肿瘤的发生发展。这主要表现在:(1)可促进肿瘤逃脱免疫监视机制、促进肿瘤生长因子产生;(2)肿瘤侵袭性增强,如导致上皮间质化,促进肿瘤转移灶形成;(3)促进肿瘤侵袭转移和转移灶肿瘤克隆性生长。TGF-β1是多类细胞的增殖抑制剂,主要参与多种细胞的生长、分化、黏附、形态改变、细胞外基质产生与凋亡,是TGF-β家族的主要成员。有报道称TGF-β1作为mi R-181a的靶基因,在肝癌中TGF-β1的表达受到mi R-181a的诱导。TGF-βR1作为TGF-β1最重要的受体,是TGF-β家族的另一成员,缺失TGF-βR1的突变细胞对TGF-β1无反应。在胰腺癌组织中,有研究结果显示,TGF-β1表达明显上调,而TGF-βR1表达明显降低,提示TGF-βR1表达降低可能是肿瘤细胞对TGF-β1反应敏感性减弱的原因之一,认为TGF-βR1低表达可能是胰腺癌逃脱TGF-β负性生长调控的机制之一。目前mi R-181a在上皮性卵巢癌中作用机制尚不明确,较少文献报道mi R-181a与TGF-β信号传导通路中关键因子TGF-β1和TGF-βR1的关系。本实验分别通过实时定量PCR及免疫组化检测不同病理特征类型的卵巢上皮组织中mi R-181a m RNA、TGF-β1m RNA、TGF-βR1 m RNA及TGF-β1、TGF-βR1蛋白的表达,探讨三者在上皮性卵巢癌中发生、发展和转移过程中可能的作用及其临床应用价值。目的本研究通过检测mi R-181a、TGF-β1、TGF-βR1在不同病理特征卵巢上皮性肿瘤组织中的表达,分析三者在上皮性卵巢癌发生发展中的作用及临床意义;通过分析上皮性卵巢癌组织中三者之间m RNA表达的相关性,探讨mi R-181a参与上皮性卵巢癌发生、发展和转移的可能分子机制。材料与方法1研究对象收集自2010年3月到2014年9月于河南省妇幼保健院和郑州大学第一附属医院行手术治疗切除卵巢的130例患者的卵巢上皮组织,年龄为17~76岁,平均年龄为47.8岁,130例中恶性组65例,良性组30例,正常组35例。正常组卵巢上皮组织取材于因良性盆腔脏器疾病行卵巢切除的患者;良性组和恶性组卵巢上皮组织分别取材于术前未行放、化疗等辅助治疗的原发性良性上皮性卵巢肿瘤和上皮性卵巢癌患者。恶性组按FIGO(2000年)分期:Ⅰ期和Ⅱ期共16例,Ⅲ期和Ⅳ期共49例;低分化33例,高分化和中分化共32例;黏液性囊腺癌14例,浆液性囊腺癌39例,子宫内膜样癌12例;无淋巴结转移27例,有淋巴结转移38例。所有病例均经手术和病理证实。2研究方法应用q RT-PCR技术检测三组中mi R-181a、TGF-β1和TGF-βR1 m RNA的表达量。应用免疫组化检测三组中TGF-β1和TGF-βR1蛋白的表达量。3统计学方法采用SPSS18.0软件对本实验数据进行统计学分析。计数资料的比较用χ2检验,采用独立两组二分类卡方检验,以α=0.05为检验水准,组间两两比较时以α=α/比较次数=0.0167为检验水准。计量资料用?x±s表示,两组间符合正态分布,方差齐性,采用两独立样本的t检验及单因素方差分析,检验水准α=0.05,组间两两比较时采用t检验,以α=α/比较次数=0.0167为检验水准。两者之间相关性分析采用Pearson相关分析法,以α=0.05为检验水准。结果1.mi R-181a m RNA在正常组、良性组和恶性组中的相对表达量分别为3.343±0.216、3.217±0.354、7.348±0.931,三组中mi R-181a m RNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。三组中两两比较:良性组mi R-181a m RNA与正常组比较差异无统计学意义(P>0.0167);恶性组mi R-181a m RNA表达明显高于正常组与良性组,差异具有统计学意义(P<0.0167)。2.TGF-β1 m RNA在正常组、良性组和恶性组中的相对表达量分别为1.132±0.404、1.237±0.091、3.154±0.231,三组中TGF-β1m RNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。三组中两两比较:良性组TGF-β1 m RNA与正常组比较差异无统计学意义(P>0.0167);恶性组TGF-β1m RNA表达明显高于正常组和良性组,差异具有统计学意义(P<0.0167)。3.TGF-βR1 m RNA在正常组、良性组、恶性组中的相对表达量分别为5.012±0.935、4.947±0.786、1.107±0.115,三组中TGF-βR1m RNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。三组中两两比较:良性组TGF-βR1 m RNA与正常组比较差异无统计学意义(P>0.0167);恶性组TGF-βR1m RNA表达明显低于良性组和正常组,差异具有统计学意义(P<0.0167)。4.TGF-βl蛋白主要表达于细胞浆,判定标准以细胞质染色呈棕黄色为阳性表达细胞。TGF-β1蛋白在恶性组、良性组和正常组中阳性表达率分别为69.2%(45/65)、20.0%(6/30)、37.1%(13/35),三组间比较差异有统计学意义(χ2=22.704,P<0.05)。两两比较:TGF-β1蛋白在良性组阳性表达率与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.0167);而恶性组阳性表达率高于正常组和良性组,差异有统计学意义(P<0.0167)。5.TGF-βRl蛋白主要表达于细胞浆,判定标准以细胞质呈棕黄色染色为阳性细胞。见附图2。TGF-βR1蛋白在恶性组、良性组与正常组中阳性表达率分别为43.1%(28/65)、73.3%(22/30)、60%(21/35),三组间比较差异有统计学意义(χ2=8.141,P<0.05)。两两比较:TGF-βR1蛋白在良性组阳性表达率与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.0167);而恶性组阳性表达率低于良性组和正常组,差异有统计学意义(P<0.0167)。6.在上皮性卵巢癌组织中,mi R-181a m RNA、TGF-β1 m RNA和TGF-βR1m RNA及后两者蛋白的表达与其FIGO分期、组织学分级、淋巴结是否转移有关(P<0.05),而与其年龄、病理类型无关(P>0.05),在FIGO分期越高,组织学分级越低,有淋巴结转移的上皮性卵巢癌组织中,mi R-181a m RNA、TGF-β1 m RNA和TGF-β1蛋白表达量越高,TGF-βR1 m RNA及其蛋白表达量越低;在三种不同病理类型上皮性卵巢癌组织的比较中,mi R-181a、TGF-β1和TGF-βR1 m RNA及后两者蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05),其中两两比较,差异无统计学意义(P>0.0167)。7.mi R-181a m RNA、TGF-β1 m RNA与TGF-βR1 m RNA在上皮性卵巢癌中表达的一致性分析经Pearson相关分析显示,在上皮性卵巢癌中,TGF-β1m RNA的表达水平与TGF-βR1 m RNA呈负相关关系(r=-0.837,P<0.05);mi R-181a m RNA与TGF-β1 m RNA的表达水平呈正相关关系(r=0.810,P<0.05),与TGF-βR1 m RNA呈负相关关系(r=-0.769,P<0.05)。结论1.在上皮性卵巢癌中,mi R-181a和TGF-β1高表达,而TGF-βR1呈低表达,三因子可能协同参与上皮性卵巢癌的发生与发展。2.mi R-181a高表达的上皮性卵巢癌组织中,TGF-β1同样呈高表达,且两者之间表达具有显著正相关性,mi R-181a、TGF-β1高表达的上皮性卵巢癌组织中TGF-βR1低表达,两者具有显著负相关性。在上皮性卵巢癌中,mi R-181a可能通过某种机制诱导TGF-β1的表达,抑制TGF-βR1的表达。3.mi R-181a和TGF-β1高表达,TGF-βR1低表达的上皮性卵巢癌组织中,FIGO分期越高,组织学分级越低,有淋巴结转移提示患者预后差,三者可能共同参与上皮性卵巢癌的侵袭与转移。