病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，继发于各种皮肤创伤后，不仅影响外观，而且常导致功能障碍。减少和解除生长过度的瘢痕是烧伤、整形外科治疗中的一个重要课题。到目前为止临床上对病理性瘢痕的处理有很大的局限性，且多易复发。随着生物化学和基因工程的发展和成熟，基因治疗成为众多学者关注的热点，虽然还处于实验阶段，但基因治疗从根本上为防治瘢痕增生性病变提供了新的希望。通过以前的研究人们知道，病理性瘢痕形成的主要机制是胶原合成的增多或失控，也证实了HSP47的表达上调与胶原合成增多成正相关。本研究拟在体外构建能阻抑HSP47表达的基因片段，以质粒为载体，以脂质体为转染载体，在证实体外转染有意义的基础上，以临床上未经治疗的瘢痕疙瘩和增生性瘢痕为研究对象，通过构建裸鼠动物模型，进行体内转染，期望利用RNAi这个新兴的基因阻断技术，阻抑HSP47的表达，进而降低胶原合成，探索一条有效的防治病理性瘢痕的方法。实验分三部分，其目的、方法、结果、结论如下：实验一：病理性瘢痕裸鼠动物模型的建立目的：建立病理性瘢痕动物模型，为基因片段的体内转染提供允许条件，同时从形态学和组织学上验证该模型的可靠性。方法：将临床上未经治疗的瘢痕疙瘩和增生性瘢痕小组织块(0．5×0．8×0．8cm)分别移植入裸鼠皮下，携带一段时间(16天)后，取组织进行光镜下分析和检测对照，验证模型。结果：术后裸鼠全部成活，植入物无变性坏死，非实验组标本保持原有的胶原形态，与原标本比较，移植标本酸性粘多糖、胶原含量等指标均无统计学差异(P＞0．05)。结论：病理性瘢痕植入裸鼠体内能保持其原有的组织学结构特征，裸鼠用作瘢痕动物模型是可行的、可靠的，且能适合作瘢痕的研究。适当调整移植标本的体积也是可行的。实验二、HSP47siRNA重组质粒构建后的大量抽提、脂质体混合液的制备目的：选择有意义基因片段，提取足够体内转染的重组质粒。方法：设计并构建含特异性干扰HSP47mRNA片段的质粒(细胞学试验部分已完成)，转染进DH5a菌中，以大剂量无内毒素试剂盒(QIAGEN)提取质粒，与脂质体(INVITROGEN 2000)混合，待体内转染。结果：试剂盒平均每柱能提取质粒180ug,共提取1100ug质粒，达到体内转染所需剂量，同时说明质粒构建是成功的。结论：体外成功构建了阻抑HSP47的质粒，也能大剂量抽提转染所需质粒。实验三、RNAi法沉默HSP47表达对病理性瘢痕影响的体内研究目的：研究RNAi法裸鼠体内转染沉默HSP47表达对病理性瘢痕的影响方法：将提取出的HSP47siRNA重组质粒与脂质体(INVITROGEN 2000)按比例混合，在裸鼠瘢痕疙瘩和增生性瘢痕动物模型构建成功后的第16天，实验组动物瘢痕标本内注射脂质体混合液(质粒30ug，脂质体75ug，0．25ml)，对照组模型动物同时间在标本内注射等量PBS液(0，25ml)，在注射后第7天获取标本作生化检测和病理分析。结果：经过HSP47siRNA表达载体体内转染干预后，瘢痕疙瘩组织中HSP47及胶原蛋白的含量均明显受到抑制，而增生性瘢痕的HSP47及胶原蛋白含量变化不大。结论：通过RNAi技术，经过HSP47siRNA表达载体特异性沉默瘢痕疙瘩中HSP47基因表达后，瘢痕疙瘩中胶原蛋白的合成和分泌均能得到明显抑制。但在增生性瘢痕中HSP47siRNA表达载体没有能够沉默HSP47基因的表达，对胶原的合成也无明显影响。瘢痕疙瘩体内基因干预试验的成功不仅能明确了HSP47基因促进瘢痕疙瘩的生成这个机制，也为我们提供了抑制瘢痕疙瘩形成的新靶点，为瘢痕疙瘩的基因治疗方面的进一步研究提供了难得的资料积累。