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目的：通过体外、体内实验观察不同浓度紫花地丁水浸出物对HBV的影响。
方法：(1)体外实验采用HBV DNA转染的HepG2.2.15细胞，加入不同浓度紫花地丁水浸出物和3TC，作用3、6、9d，通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞毒性。ELISA法和LSCM分析上清液和细胞内HBsAg、HBeAg或HBcAg的表达：荧光定量PER法观察药物对HBV DNA的作用。(2)体内实验以鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA阳性雏鸭作动物模型，分别给予30mg·kg-1·d-1、6mg·kg-1·d-1、1.2 mg·kg-1·d-1的紫花地丁水浸出物，每天1次，连续给药10d。定期采血，采用赖氏法检测用药前后血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的变化；实时荧光定量PCR法观察药物对鸭血清中DHBV DNA的影响。阳性对照药给以3TC(2 mg·kg-1·d-1)；采用紫花地丁水浸出物1.2mg·kg-1·d-1与3TC(2 mg·kg-1·d-1)联合给药作为联合处理组；病毒模型对照组和空白对照组(DHBV DNA阴性的雏鸭)，给予相同体积的生理盐水。
结果：(1)体外实验
①紫花地丁水浸出物第3、6d TC50，均大于60mg/ml，第9d为49.316mg/ml；在3、6、9d对HBsAg的IC50分别是22.895 mg/ml、10.668 mg/ml和20.387 mg/ml。第3d TI值大于2.621，第6d大于5.624，第9d为2.419。再结合人体临床用量(15～30g/d)，确定3mg/ml、0.6mg/ml和0.12 mg/ml作为实验浓度。
②3TC 100μg/ml组有明显细胞毒性(P<0.05)；50μg/ml组在第9d与细胞对照组差异显著(P<0.05)；25μg/ml组无细胞毒性(P>0.05)。参考3TC对HepG2.2.15细胞的TC50(>100μm)，确定50μg/ml作为阳性对照3TC药量。
③MTT实验结果发现所有紫花地丁水浸出物浓度组均无明显细胞毒性，且具有促进细胞生长的作用(P<0.05)。
④ELISA法观察药物对HBV HBsAg和HBeAg的影响。紫花地丁水浸出物0.12mg/ml组对HBsAg的抑制率随时间延长逐渐降低，在第3、6d与细胞对照组差异显著(P<0.05)；0.6和3 mg/ml组抑制率随时间延长逐渐增大，0.6 mg/ml组在所有时间点与细胞对照组差异显著(P<0.05)，3 mg/ml组在第9d有显著差异(P<0.01)。0.6 mg/ml组在第6、9d抑制率明显高于3 mg/ml组(P<0.05)。3TC50μg/ml组有明显抑制作用(P<0.05)，随着培养时间的延长抑制率逐渐降低。紫花地丁水浸出物0.6 mg/ml组在第9d抑制作用强于3TC 50μg/ml组(P<0.01)。对HBeAg，紫花地丁水浸出物0.12 mg/ml组抑制作用随时间延长逐渐增强，在第6、9d与细胞对照组差异显著(P<0.01)；0.6 mg/ml组在第6d与细胞对照组有显著差异(P<0.01)；3 mg/ml组与细胞对照组比较，在所有时间点均有显著差异(P<0.05)。3TC 50μg/ml组仅第6d有抑制作用(P<0.05)。与3TC比较，紫花地丁水浸出物0.12 mg/ml组在第3d和6d抑制作用更强(P<0.05)；0.6mg/ml组仅在第9d抑制率较高(P<0.05)；3mg/ml组在所有时间点抑制作用均优于3TC(P<0.05)。
⑤LSCM检测药物对细胞内HBV HBsAg、HBeAg和HBcAg的影响。紫花地丁水浸出物3mg/ml组对三种抗原均有抑制作用，与细胞对照组差异显著(P<0.01)；3TC 50μg/ml组对HBsAg和HBeAg有明显抑制作用(P<0.01)，但对HBcAg无抑制作用(P>0.05)。两种药物对HBsAg抑制作用无显著差异(P>0.05)，紫花地丁对HBeAg和HBcAg抑制作用更强(P<0.05)。
⑥荧光定量PCR法检测发现：所有紫花地丁水浸出物浓度组在第3d有明显抑制作用(P<0.05)；在第6、9d，仅3mg/ml组差异明显(P<0.05)。3TC在第3、6d与细胞对照组差异显著(P<0.05)，第9d无抑制作用(P>0.05)。紫花地丁水浸出物0.12mg/m1组在第3d、3mg/ml组在第9d抑制作用均优于3TC(P<0.05)。
(2)体内实验
①用赖氏比色法对ALT和AST进行检测，空白对照组和病毒模型对照组在实验期间ALT和AST无明显变化且两组比较无统计学意义(P>0.05)；30mg·kg-1·d-1紫花地丁水浸出物组在T10AST升高(P<0.05)，提示30mg·kg-1·d-1紫花地丁水浸出物组对肝脏可能有毒性；6mg·kg-1·d-1紫花地丁水浸出物组在P3使AST降低(P<0.05)，1.2mg·kg-1·d-1紫花地丁水浸出物组在T10、P3明显降低AST含量(P<0.05)。3TC组在T10ALT升高(P<0.05)、在T10和P3AST升高(P<0.05)；3TC与紫花地丁水浸出物联合治疗组在T10ALT明显升高(P<0.05)。
②实时荧光定量PCR法检测鸭血清中的DHBV DNA含量的变化。实验期间空白对照组未检测出DHBV DNA，模型对照组DNA含量稳定。3TC组在T10明显降低DHBV含量(P<0.05)，在P3 DHBV DNA有明显反弹(P<0.05)；3TC与紫花地丁水浸出物联合治疗组在T5、T10明显降低DHBV HBV含量(P<0.05)，在P3 DHBV DNA有明显反弹(P<0.05)；紫花地丁水浸出物30和6mg·kg-1·d-1组在T10明显降低DHBV HBV含量(P＜0.05)；紫花地丁水浸出物1.2mg·kg-1·d-1组无明显DHBV DNA抑制作用(P＞0.05)。
结论：紫花地丁水浸出物可抑制HepG2．2．15细胞分泌的HBsAg和HBeAg和细胞内的HBsAg、HBeAg和HBcAg，且对HBV DNA也有明显抑制作用。在体内实验中，30mg·kg-1·d-1紫花地丁水浸出物组对AST有明显升高作用，但6mg·kg-1·d-1紫花地丁水浸出物组可降低AST水平，紫花地丁水浸出物30 mg·kg-1·d-1和6mg·kg-1·d-1组能降低鸭血清中DHBV DNA，3TC与紫花地丁联合治疗组能够抑制DHBV DNA，但停药反弹明显。