论文部分内容阅读
研究目的:
研究表皮调节素(epiregulin)在血小板源性生长因子-BB(platelet—derived growth factor-BB,PDGF—BB)促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖中的作用,并阐明这种作用是特异存在于VSMC中还是普遍存在多种类型的肿瘤细胞中。
研究方法:
培养血管平滑肌细胞株CS-54、胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901、乳腺癌细胞株MCF-7和肺癌细胞株A549,用Western blotting法检测epiregulin在这些细胞株中有无表达,然后进一步检测PDGF-BB对epiregulin蛋白表达的影响；用Real-time PCR法检测PDGF—BB对CS-54细胞epiregulin mRNA表达的影响；针对大鼠epiregulin基因的mRNA序列合成siRNA,采用脂质体转染法将其转染CS-54细胞；用Western blotting法检测siRNA转染后CS-54细胞中epiregulin蛋白表达的变化；用MTT法检测PDGF-BB在不同浓度和不同作用时间下对CS-54细胞增殖效应的影响；Epiregulin siRNA转染48 h后加入PDGF—BB,然后进一步分析干扰epiregulin表达对PDGF-BB促进CS-54细胞增殖效应的影响。
研究结果:
(1)在血管平滑肌细胞株CS-54和乳腺癌细胞株MCF-7中检测到epiregulin的蛋白表达,其它细胞株如胃癌细胞BGC-823、SGC-7901和肺癌细胞A549中没有检测到epiregulin的蛋白表达。
(2)从mRNA水平和蛋白水平检测到PDGF—BB可使CS-54细胞epiregulin表达上调,但对MCF-7细胞不起作用。
(3)PDGF—BB促进血管平滑肌细胞增殖,效应具有浓度和时间依赖性,在50ng／ml PDGF-BB作用24h时其作用最为明显(P<0.05)。
(4)以epiregulin siRNA转染CS-54细胞,可使epiregulin蛋白表达水平明显降低,并明显阻断PDGF-BB对CS-54细胞增殖的促进作用(P<0.05)。
结论:
PDGF-BB通过诱导epiregulin表达刺激血管平滑肌细胞增殖,并且这种作用是血管平滑肌细胞所特有的。