水飞蓟宾(silibinin)为黄酮木脂素类化合物,来源于菊科植物水飞蓟(Silybum marianum)的果实和种子。水飞蓟宾被作为一种经典的保肝药物应用于临床治疗,近年的研究表明水飞蓟宾也具备一定的抗肿瘤活性。本实验发现无论在有血清还是无血清的培养环境下,水飞蓟宾均能够诱导HeLa细胞发生凋亡(apoptosis)与自噬(autophagy),且自噬进程不但不能保护细胞,反而会杀伤细胞。水飞蓟宾可以通过激活caspase-3以及促进细胞色素C的释放诱导凋亡,同时通过上调Beclin1及促进LC3的转化诱导自噬。水飞蓟宾通过活性氧及活性氮诱导上述进程从而抑制细胞活力,其中主要发挥作用的活性氧形式为超氧阴离子。我们还发现水飞蓟宾可以通过造成细胞内氧化损伤并干扰线粒体正常呼吸功能来杀伤细胞。随后我们对水飞蓟宾诱导的活性氧通过何种机制产生进行了研究。我们发现p53蛋白在水飞蓟宾诱导活性氧产生的过程中发挥了重要的作用。水飞蓟宾可激活p53及与其相关的JNK和PUMA通路。使用p53的特异性抑制剂PFT-α不但可以抑制p53的激活还可抑制JNK的激活以及活性氧的产生,同样JNK的特异性抑制剂SP600125亦抑制了p53的激活以及活性氧的产生。而活性氧的清除剂NAC可以抑制JNK及p53的激活,以上结果表明水飞蓟宾通过ROS-JNK-p53循环从而诱导活性氧的产生。我们使用p53功能缺失的人表皮癌A431细胞作为对照模型以考察p53在水飞蓟宾诱导活性氧产生中所发挥的作用,结果显示当p53功能缺失时水飞蓟宾无法诱导活性氧的产生,说明p53在水飞蓟宾诱导活性氧产生的过程中发挥着关键的作用。在考察p53对活性氧产生作用的同时,我们也考察了其在水飞蓟宾诱导一氧化氮及活性氮过程之中的作用,结果显示水飞蓟宾所诱导的一氧化氮产生不依赖于p53的功能。但是p53在水飞蓟宾诱导的GSH耗竭的过程中起到关键作用,该过程能够增强一氧化氮的细胞毒性。综上所述,水飞蓟宾能够通过诱导活性氧／活性氮的产生从而使细胞发生凋亡以及自噬,在此过程中p53蛋白发挥了重要的作用。当p53蛋白缺失时,水飞蓟宾不能诱导活性氧的产生也不能诱导GSH耗竭的发生,但水飞蓟宾仍然可以诱导一氧化氮水平的升高,说明水飞蓟宾诱导活性氧的产生依赖于p53功能正常而其诱导一氧化氮产生的能力则与p53蛋白无关。