拟南芥AtGLR2.9组织特异性表达和突变体表型分析

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钙信号反映光照、温度、机械损伤、盐胁迫、干旱、渗透压、植物激素、病原菌激发子和结瘤因子等各种胁迫,并传递信号激发下游基础防御反应。细胞质内钙离子的浓度、分布变化形成了钙信号。非选择型离子通道(NSCC)是一种常见的植物细胞膜上的离子通道,并且参与多种阳离子的运输。AtGLR基因家族属于非选择性离子通路,对于阳离子尤其是钙离子的流入有重要调节作用。在拟南芥AtGLR家族中有二十种AtGLR蛋白,他们主要受到Glu,Gly等氨基酸的调控来控制细胞质内钙离子浓度。最近研究表明,AtGLR3.3影响GSH介导的拟南芥先天免疫反应。因此本实验以生物化学与分子生物学为基础,将AtGLR2.9启动子克隆到双元表达载体pORE R1中β-葡萄糖醛酸酶报告基因(GUS)的上游,形成PromoterAtGLR2.9∷GUS融合基因。通过农杆菌侵染野生型拟南芥花序,多代筛选,得到稳定表达该融合基因的拟南芥T3代转基因种子。利用GUS基因组织特异性表达活性进行AtGLR2.9启动子活性的组织定位,发现AtGLR2.9在拟南芥叶脉与根尖均有表达。利用Col-0与atglr2.9在不同离子、激素和氨基酸的MQA培养基下培养发现Col-0在500μMCys的浓度下,Col-0的侧根长生长显著被抑制,而突变体则不受影响。本研究将进一步扩展对拟南芥AtGLR基因家族的认识,为进一步解释钙离子通道的机制提供依据,阐明钙信号在生物体内的作用奠定基础。
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