本论文采用活性跟踪分离等现代天然药物研究思路和方法,对毛瓣无患子「Sapindusrarak DC.」果皮、怀菊「Chrysanthemum morifolium Ramat.‘huaiju’cv.nov.」花和石榴「Punicagranatum Linn.」花等3种天然药物的化学成分和药理活性进行研究,旨在为这些传统药用资源开发和临床应用提供详实的化学和药理学信息。主要内容和结果如下:1.毛瓣无患子果皮降脂生物活性成分的研究采用体外抑制胰脂肪酶活性筛选体系和油负荷小鼠体内筛选模型,筛选出毛瓣无患子果皮提取物经HP-20柱色谱甲醇洗脱流分为降脂作用活性部位群,毛瓣无患子果皮甲醇提取物(IC₅₀=614μg/mL)及其经HP-20柱色谱甲醇洗脱流分(IC₅₀=420μg/mL)显示了较强的胰脂肪酶活性抑制作用。二者在500 mg/kg剂量下,能显著降低油负荷小鼠血浆中甘油三酯水平。采用活性跟踪分离,通过大孔树脂吸附柱色谱、硅胶柱色谱、ODS柱色谱以及制备HPLC等现代色谱分离技术,从活性部位中分离得到23个化合物,通过理化常数测定、波谱分析等方法,鉴定了它们的结构,其中,7个新化合物为齐墩果烷型三萜皂苷类成分,分别为raraosideA（1）,rarasaponinⅠ（2）、Ⅱ（3）、Ⅲ（4）、Ⅳ（5）、Ⅴ（6）和Ⅵ（7）。余下16个已知化合物,包括12个齐墩果烷型三萜皂苷类化合物:sapindoside B（8）,hederagenin 3-O-（2-O-acetyl-β-D-xylopyranosyl）-（1→3）-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-α-L-arabinopyranoside（9）,hishoushi-saponinEe（10）,mukurozi-saponin E₁（11）,hederagenin 3-O-（3,4-di-O-acetyl-β-D-xylopyranosyl）-（1→3）-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-α-L-arabinopyranoside（12）,hederagenin 3-O-α-L-arabino-pyranosyl-（1→3）-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-α-L-arabinopyranoside（13）,hederagenin 3-O-（2,4-di-O-α-L-arabinopyranosyl）-（1→3）-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-α-L-arabinopyranoside（14）,mukurozi-saponin G（15）,hederagenin 3-O-α-L-arabinofuranosyl-（1→3）-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-α-L-arabinopyranoside（16）,hederagenin 3-O-（3,5-di-O-α-L-arabinofuranosyl）-（1→3）-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-α-L-arabinopyranoside（17）,mukurozi-saponins Y₁（18）和mukurozi-saponinsY₂（19）;4个倍半萜烯苷类化合物:mukuroziosideⅠa（20）,mukuroziosideⅡa（21）,mukuroziosideⅠb（22）和mukuroziosideⅡb（23）。已知化合物中,化合物9、10、13、14和16—22为首次从该种植物中分离得到。测定了从毛瓣无患子果皮中分离的13种三萜皂苷类和3种倍半萜烯苷类化合物对胰脂肪酶活性的抑制作用。三萜皂苷类成分抑制胰脂肪酶活性(IC₅₀)顺序为:11（100μM）＞10（117μM）＞17（121μM）＞8（125μM）=16（125μM）＞12（129μM）＞13（130μM）＞2（131μM）＞1（151μM）＞15（16μM）＞3（172μM）＞9（300μM）＞4（576μM）;倍半萜烯苷类化合物（20,21和23）未显示明显抑制活性。根据活性测定结果,解析毛瓣无患子果皮中三萜皂苷类成分抑制胰脂肪酶活性构效关系如下:与吡喃型阿拉伯糖基相比,糖链末端吡喃型木糖基可增强胰脂肪酶抑制活性;末端均为阿拉伯糖的皂苷类成分,呋喃型阿拉伯糖对抑制作用贡献强于吡喃型阿拉伯糖;末端糖基上乙酰基取代数量和位置不同,对抑制活性的影响不同。同时测定了果皮中含量高且胰脂肪酶抑制活性强的化合物13和15及倍半萜烯苷类化合物23对油负荷小鼠血浆中甘油三酯（triglyceride,TG）水平的影响,结果表明,13和15可显著降低油负荷小鼠血浆中甘油三酯水平。以上结果表明,毛瓣无患子果皮主要含有三萜皂苷和倍半萜烯苷类成分,其中三萜皂苷类成分可显著抑制胰脂肪酶活性,降低油负荷小鼠血浆中甘油三酯水平,是毛瓣无患子果皮降脂作用的主要活性成分,作为活性先导化合物,为降血脂创新天然药物的研发提供了研究素材。2.怀菊抗过敏生物活性成分的研究采用RBL-2H3细胞模型及compound 48/80诱导小鼠瘙痒反应模型,测定了怀菊、亳菊、祁菊、济菊、滁菊、杭白菊、杭黄菊及贡菊等8种不同菊花道地药材提取物体内和/或体外抗过敏活性,采用RBL-2H3细胞筛选模型,确定了抗过敏活性强的怀菊提取物的大孔树脂60%(IC₅₀=6.8μg/mL)和95%乙醇洗脱流分(IC₅₀=17μg/mL)为其抑制RBL-3H3细胞脱颗粒反应的活性部位群;采用活性跟踪分离,通过大孔树脂吸附柱色谱、硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱以及制备HPLC等现代色谱分离技术,从怀菊75%乙醇提取物中分离得到19个化合物,通过理化常数测定、波谱分析等方法,鉴定了它们的结构,其中,1个黄酮类新化合物,为香叶木素7-O-（6″-O-对羟基苯乙酰基）-β-D-葡萄糖苷（diosmetin 7-O-（6″-O-p-hydroxyphenylacetyl）-β-D-glucopyranoside,1）。余下18个已知化合物,包括12个黄酮类化合物:木犀草素（luteolin,2）,芹菜素（apigenin,3）,金合欢素（acacetin,4）,香叶木素（diosmetin,5）,香叶木素7-O-β-D-葡萄糖苷（diosmetin 7-O-β-D-glucoside,6）,木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷（luteolin 7-O-β-D-glucoside,7）,金合欢素7-O-β-D-葡萄糖苷（acacetin 7-O-β-D-glucoside,8）,芹菜素7-O-β-D-葡萄糖苷（apigenin 7-O-β-D-glucoside,9）,金合欢素7-O-（6″-O-乙酰基）-β-D-葡萄糖苷（acacetin 7-O-（6″-O-acetyl）-β-D-glucoside,10）,木犀草素7-O-β-D-芸香糖苷（scolimoside,11）,香叶木苷（diosmin,12）和蒙花苷（linarin,13）;2个二氢黄酮类化合物:圣草酚（eriodictyol,14）和橙皮素7-O-β-D-葡萄糖苷（hesperetin7-O-β-D-glucoside,15）;4个咖啡酰基奎宁酸类衍生物:3,5-双咖啡酰基奎宁酸（3,5-dicaffeoyl-quinicacid,16）,1,3-双咖啡酰基-epi-奎宁酸（1,3-dicaffeoyl-epi-quinic acid,17）,灰毡毛忍冬素F（macranthoin F,18）和绿原酸（chlorogenic acid,19）。已知化合物中,化合物11、12及18为首次从该属植物中分离得到。采用HPLC-DAD法,对比分析了怀菊和杭白菊药材样品HPLC指纹图谱,结果表明,香叶木素、木犀草素、芹菜素和金合欢素等游离黄酮苷元类成分在两种菊花药材中的种类和含量差异较大,其中香叶木素和金合欢素是怀菊的特异性成分。因此,采用RBL-2H3细胞筛选模型,测定了怀菊抗过敏活性部位中香叶木素、木犀草素、芹菜素和金合欢素等4种黄酮苷元类成分体外抗过敏活性,它们对抗原或钙离子载体刺激RBL-2H3细胞脱颗粒等即时相反应及抗原刺激TNF-α释放等延迟相反应均有明显抑制作用。在即时相反应中,木犀草素对抗原或钙离子载体刺激RBL-2H3细胞脱颗粒的抑制作用最强,IC₅₀值分别为2.8和3.8μM;在延迟相反应中,香叶木素对抗原刺激RBL-2H3细胞释放TNF-α抑制作用最强,IC₅₀值为3.4μM。首次对怀菊特异性成分香叶木素抗过敏活性作用靶点进行了初步研究。采用荧光探针Fluo 3/AM,测定了香叶木素对RBL-2H3细胞内钙离子浓度的影响,它能抑制抗原刺激RBL-2H3细胞中[Ca²⁺]_i增加,IC₅₀值为3.6μM,而对外钙内流无影响,该结果提示:香叶木素抑制RBL-2H3细胞即时相反应的作用靶点与抑制内钙离子释放和钙离子超载引起的脱颗粒反应有关。采用RT-PCR测定了香叶木素对RBL-2H3细胞中细胞因子mRNA表达的作用,结果表明:香叶木素抑制RBL-2H3细胞延迟相反应的作用靶点与抑制抗原诱导的细胞因子TNF-α和IL-4 mRNA表达有关。以上结果表明,怀菊作为药用菊花的代表,具有较强的体外、体内抗过敏活性。怀菊中主要含有黄酮类和咖啡酰基奎宁酸类成分,其中黄酮苷元类成分是其抗过敏主要活性成分,香叶木素具有良好体外抗过敏活性,作为活性先导化合物,为抗过敏创新天然药物的研发提供了研究素材。3.石榴花抑制TNF-α诱导细胞毒作用活性成分的研究采用对TNF-α敏感的小鼠成纤维瘤L929细胞活性筛选模型,筛选出石榴花提取物乙酸乙酯萃取物为抑制TNF-α诱导细胞毒作用的活性部位群。采用活性跟踪分离,通过大孔树脂吸附柱色谱、硅胶柱色谱、ODS柱色谱以及制备HPLC等现代色谱分离技术,从活性部位中分离得到9个化合物,通过理化常数测定、波谱分析等方法,鉴定了它们的结构,其中,1个新化合物为taraxastane型三萜酸类成分,命名为punicanolic acid（1）。余下8个已知化合物,包括4个三萜酸类化合物:齐墩果酸（oleanolic acid,2）,乌苏酸（ursolic acid,3）,马斯里酸（maslinic acid,4）和亚细亚酸（asiatic acid,5）;2个没食子酰基葡萄糖苷类化合物:1,2,6-O-三没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷（1,2,6-tri-O-galloyl-β-D-glucopyranoside,6）和1,2-O-双没食子酰基-4,6-O-（S）-六羟基联苯二甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷（1,2-di-O-galloyl-4,6-O-（S）-hexahydroxydiphenoyl-β-D-glucopyranoside,7）;2个黄酮类化合物:木犀草素（luteolin,8）和tricetin（9）。已知化合物中,化合物6、7、9为首次从该属植物中分离得到。测定了从石榴花中分离的5个三萜酸类（1—5）、2个没食子酰基葡萄糖苷类（6、7）和2个黄酮类化合物（8、9）对TNF-α诱导L929细胞毒作用的抑制活性。结果表明,化合物1、2、4、5、6、7和8均显示出良好的抑制TNF-α诱导L929细胞毒作用的活性,可有效降低L929细胞对肿瘤坏死因子TNF-α的敏感性。其中,punicanolic acid的抑制作用强于阳性对照药胡椒碱。以上结果表明,石榴花中主要含有三萜酸、没食子酰基葡萄糖苷及黄酮类成分,其中punicanolic acid显示了较强的抑制TNF-α诱导L929细胞毒作用的活性,可有效降低L929细胞对肿瘤坏死因子TNF-α的敏感性,具有潜在的保肝活性。