我室从1982年开始从事肝癌单克隆抗体及其基因工程改造研究，曾成功构建并高效原核表达了抗肝癌单链抗体。在此基础上，我们尝试用sFv 5′端带有引导序列、3′端带有TNF-α基因的分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因修饰人T淋巴细胞，使其表达并分泌针对人肝癌细胞的靶向性sFv-TNF-α融合蛋白，观察转导细胞对体外培养肝癌细胞的杀伤作用及其体内回输对裸鼠移植瘤生长的影响。 首先采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗肝癌sFv基因的N末端，再将sFv基因的C末端与人TNF-α基因连接构成分泌型单链双功能抗体基因，将该重组基因克隆至带有GFP报告基因的真核表达载体中，构建了分泌型抗肝癌单链双功能抗体融合GFP表达载体。用磷酸钙介导重组载体转染小鼠成纤维细胞NIH3T3，在NIH3T3细胞中成功地表达了sFv-TNFα-GFP融合蛋白，转染后20h即可观察到转染的部分细胞发出较强的绿色荧光，证实构建的分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因可以在真核细胞中有效地表达。将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLXSN，构建抗肝癌单链双功能抗体基因逆转录病毒表达载体，用磷酸钙共沉淀法转染PA317包装细胞，G418筛选，挑选50个细胞集落并扩大培养，测定了29