氨甲酰妥布霉素高产菌株的诱变选育及其发酵代谢研究

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本文以黑暗链霉菌9916为出发菌株,采用NTG、自身终产物妥布霉素耐受处理等诱变方法筛选得到一株稳定的氨甲酰妥布霉素高产菌株NTN201,其自然分离株201-420的总效价达到1143u/ml,为出发菌株的2.6倍,氨甲酰妥布霉素含量也由原来的74%提高到88.5%。通过发酵工艺的优化,菌株201-420的发酵单位又提高了11.6%,达到1275u/ml,为出发菌株的2.9倍,氨甲酰妥布霉素含量提高至92.5%。 以突变株NTN201为对象,考察了16种氨基酸、速效碳源、速效氮源、磷酸盐及细胞壁合成抑制剂磷霉素对氨甲酰妥布霉素生物合成的影响。结果表明,于发酵36h向发酵液中添加一定浓度的Glu、Gly或α-酮戊二酸有利于总效价及氨甲酰妥布霉素含量的提高。当培养基中速效碳源、速效氮源达到一定浓度时,对氨甲酰妥布霉素生物合成起阻遏作用。高浓度磷酸盐抑制抗生素的生物合成。于发酵36h向发酵液中添加一定浓度的磷霉素,有利于总效价的提高。 研究了NH4+对氨甲酰妥布霉素生物合成的重要作用。结果表明,NH4+在菌体内通过转化为Glu而进入氨甲酰妥布霉素生物合成途径。 研究了无机磷酸盐抑制氨甲酰妥布霉素生物合成的作用机制。主要有两方面因素:(1)磷酸盐本身阻遏L-谷氨酰胺:青蟹-肌醇单酮转氨酶的合成,影响了从葡萄糖合成2-DOS的氨基化作用。(2)通过胞内效应剂ATP控制抗生素的生物合成。
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