circRNA在食管鳞癌患者血浆中差异性表达及临床意义

来源 :川北医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tonnyliu2042
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目的:通过高通量测序方法筛选食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)及配对癌旁组织中的差异表达circRNA;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测circRNA在ESCC患者血浆中表达水平,评估circRNA作为ESCC诊断生物标志物的可行性及初步探索差异表达circRNA的临床意义。方法:1.收集2019年1月至2019年3月南充市中心医院胸外科初治ESCC患者6例,将6对术后ESCC组织及配对的癌旁组织进行高通量测序,筛选差异性高表达circRNA,进一步在ESCC细胞系中通过qRT-PCR筛选差异性高表达circRNA,并通过在线NCBIblast序列相似性比较,确定候选circRNA。2.收集2019年3月至2019年9月南充市中心医院初治ESCC患者70例,为ESCC组,并行肿瘤分期;健康成人25例,为对照组。收集ESCC组中经根治性手术治疗后7天血浆样本;收集ESCC组中经1周期相同方案化疗后7天血浆样本。3.通过qRT-PCR方法检测ESCC组、对照组、手术后样本、化疗后样本血浆中候选circRNA相对表达量,分别比较ESCC组、Ⅰ期ESCC患者与对照组中候选circRNA相对表达量;分别比较手术、化疗前后候选circRNA相对表达。4.建立Kaplan-Meier曲线分析候选circRNA表达量高低与术后患者预后的关系;建立ROC曲线,评估候选circRNA对ESCC的诊断价值。使用SPSS 22.0和GraphPad Prism 7.0软件进行相关数据统计分析。计数资料采用χ2检验,符合正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示,采用独立样本t检验;不符合正态分布的计量资料以中位数表示,采用独立样本非参数检验。计量资料均以α=0.05为检验标准,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.测序结果提示显著高表达circ RNA共22个(P<0.05,|FC|>1.5);在8个ESCC细胞系中进一步筛选得到6个上调circRNA,并通过在线NCBIblast 序列相似性比较,hsa_circ_0060927、hsa_circ_0111350、hsa_circ_0004390 为真性 circRNA,最终确定为候选 circRNA。2.hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390 在 ESCC 组与对照组血浆中存在差异性表达(2.567±2.996 vs 0.248±0.249,P=0.0002;2.361±2.990 vs 0.181±0.234,P=0.0018),均为表达上调,差异具有统计学差异(P<0.05);hsa_circ_0111350在ESCC组和对照组血浆中未见表达。3.比较ESCC Ⅰ期患者与对照组候选circRNA相对表达,进一步探索ESCC患者血浆中候选circRNA的早期诊断价值。根据2017年UICC/AJCC第8版食管癌TNM分期标准,ESCC组中Ⅰ期患者30例。结果显示:hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390 在 ESCC Ⅰ 期患者与对照组血浆中存在差异表达(3.880±3.516 vs 0.248±0.249,P=0.0002;1.080±1.662 vs 0.248±0.249,P<0.0001),差异有统计学意义(P<0.05)。4.比较ESCC患者手术、化疗前后候选circRNA相对表达。ESCC组中经根治性手术患者43例,经化疗患者21例,结果显示:hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390在手术前后血浆中存在差异表达(4.800±2.254 vs 0.935±0.821,P<0.0001;2.250±0.978 vs 0.860±0.584,P<0.0001),差异有统计学意义(P<0.05);hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390在化疗前后血浆中存在差异表达(2.625±0.783 vs 1.138±0.529,P<0.0001;4.925±1.907 vs 1.635±0.879,P<0.0001),差异有统计学意义(P<0.05)。5.分析候选circRNA表达量高低与根治性术后患者预后的关系。以术前hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390相对表达量中位值为界,分别将根治性手术患者分为高表达组与低表达组,随访生存时间24个月,Kaplan-Meier 曲线显示:hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390 表达高低与ESCC根治性手术患者生存之间差异无统计学意义(P=0.6450,P=0.5512)。6.根据ESCC患者手术前或化疗前circRNA相对表达量,建立ROC曲线。结果显示:hsa_circ_0060927诊断ESCC敏感性为80.6%,特异性为 90.0%,AUC 值为 0.9289(95%CI 0.871-0.987,P=0.017);hsa_circ_0004390 诊断 ESCC 敏感性为 80.6%,特异性为 95.0%,AUC值为0.946(95%CI 0.899-0.992,P=0.014);联合检测对诊断ESCC敏感性为 88.1%,特异性为 95.0%,AUC 值为 0.970(95%CI 0.940-1.000,P=0.002)。结论:1.hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390 在 ESCC 患者与健康人群血浆中存在差异表达,具有ESCC早期诊断价值。联合检测hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390对诊断ESCC具有更高的敏感性和特异性。2.ESCC 患者经化疗、手术治疗,hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390表达量显著下降,提示具有监测疾病缓解的作用,可能作为评估治疗疗效的指标之一。3.hsa_circ_0060927、hsa_circ_0004390表达水平尚不足以能够作为ESCC患者根治性手术后的预后因子。
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