论文部分内容阅读
以苹果炭疽病菌、番茄枯萎病菌、梨黑星病菌为供试病菌，对7种中草药提取物的抗菌活性进行了研究，并且对不同提取方法进行了探讨，研究结果如下： 1．不同提取方法的提取率及提取物抗菌活性表明，不同溶剂提取效率均以索氏抽提法和超声波法为高；同种提取方法以氯仿、95％乙醇提取效率高。从提取物抗菌活性来看，同种溶剂不同提取方法提取物活性差异不大，但以索氏提取物和超声波提取物抗菌活性略高。实验室提取可以95％乙醇做溶剂采用超声波法提取较为理想。 2．7种中药材提取物对供试植物病原菌的抗菌活性研究表明，中药材CCB对苹果炭疽病菌有良好的抑制作用，氯仿、95％乙醇提取物抑菌效果在72h时，对苹果炭疽病菌的EC50分别为0.5474g／L、1.4785g／L；95％乙醇提取物经过液液分配得到有机相和水相，其石油醚相和乙酸乙酯相抑制效果较好，其EC50分别为2.8092g／L、0.3246g／L，说明抗菌活性物质极性中等偏低；乙酸乙酯相进一步柱层析，得到不同馏分，生测结果表明乙酸乙酯洗脱C1馏分活性最强，EC50为0.058g／L，进一步说明活性成分的极性为中等；C1馏分用制备型薄层分离，在254nm紫外光下观察，Rf=0.5处有一个红色带，经过生测其对苹果炭疽病菌的EC50为0.18g／L，而分离的色素进行生测活性很低，说明Rf=0.5的组分为实验跟踪的活性成分。 3．中药材CCB鲜样、干样及植株不同部位活性研究表明，植株干样、鲜样对苹果炭疽病菌的抑制作用没有差异，但其整株活性明显高于植株各个器官部分（根、茎、叶）的活性，根、茎、叶提取物中以叶的活性最差。 4．中药材CCB与化学药剂比较研究表明，中药材CCB提取物对苹果炭疽病菌的抑制作用低于化学药剂多菌灵、代森锰锌，后者对苹果炭疽病菌的EC50分别为0.13mg／L、24.4728mg／L，而中药材CCB柱层析C1馏分的EC50为58mg／L，制备型薄层分离得到的活性物质的EC50为180mg／L。 5．中药材CCB粗提物活体实验表明，其对苹果炭疽病具有一定的保护和治疗作用，但保护作用优于治疗作用，且在浸果1d后接菌保护作用最高。以多菌灵做参比，中药材CCB粗提物在10g/L浓度下防效与多菌灵（100mg／L）防效相当，甚至略高，持效期比多菌灵短，但两种药剂总体防效都不是很高，有待进一步研究其他的作用机理。 6．中药材CCB抗菌活性成分的分离、鉴定。对其95％乙醇提取物采用系列极性溶剂液液分配，活性成分进行柱层析，进行梯度洗脱，不同馏分结合生测确定活性馏分为O，活性馏分口经过制备薄层分离得到本实验跟踪的活性组分。薄层分离以苯：甲醇（28：5）为展开剂，上行展开，活性组分的RPO．5。比较薄层分离组分和柱层析CI馏分的紫外吸收光谱，具有相同的吸收波长，分别为Z14nm、282urn；分别以Z14nm、282urn为检测波长，进行HPLC分析，均有一个明显的主峰，保留时间分别为2．71 6min、2．843min；活性组分进行GC分析得到一个主峰13．363min。为了进一步明确活性组分，进行 GC－MS分析，从总离子流图上看到 11．88min、12．83min两个离子峰，分别对这两个峰进行质谱分析，具有相同的分子离子峰m／e 2 86，基峰分别为120．9、133．9，对比质谱图库得到两个离子峰为黄酮类、黄酮醇类化合物，这一结果与前面的紫外吸收光谱、化学性状相一致。