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目的: 运用高通量细胞因子抗体芯片技术,观察艾灸对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠血清细胞因子蛋白表达的影响,并筛选差异蛋白进行分析和验证,探讨艾灸对溃疡性结肠炎大鼠炎症反应的调节作用,阐释艾灸治疗溃疡性结肠炎的免疫调节效应机制,为艾灸治疗溃疡性结肠炎的机制研究提供科学依据。 方法: 48雄性SD大鼠随机分为正常组和造模组,造模组大鼠采用抗原免疫加福尔马林局部刺激复合法制备实验性溃疡性结肠炎模型。造模成功后,将造模大鼠随机分为模型组、艾灸组和西药组。艾灸组取双侧天枢穴进行温和灸治疗,西药组采用美沙拉秦肠溶片溶液灌胃治疗,均连续治疗8天。治疗结束后取结肠组织进行大鼠结肠组织形态学观察,运用细胞因子抗体芯片检测技术观察大鼠血清34种细胞因子蛋白的表达,采用Gene Ontology(GO)和Kyoto encyclopedia of genes and genomes(KEGG) pathway分析进行差异细胞因子蛋白生物功能和通路分析,采用ELISA法对显著差异细胞因子蛋白进行验证。 结果: 1.大鼠结肠组织损伤评分与病理学观察 与正常大鼠比,模型组大鼠结肠大体形态损伤评分与结肠病理组织学损伤评分均显著升高(P<0.01);与模型组比,艾灸组和西药组大鼠结肠大体形态损伤评分与结肠病理组织学损伤评分均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。 与正常组大鼠相比,模型组大鼠结肠黏膜损伤严重,肠上皮缺损,结肠黏膜结构不清,腺体数目减少,排列紊乱,黏膜及黏膜下层有大量炎性细胞浸润,部分溃疡形成。与模型组比,艾灸组大鼠结肠上皮由新生上皮细胞所覆盖,结肠黏膜结构较为完整,腺体排列较规则,但仍有少量破坏,溃疡有愈合,黏膜及黏膜下层仍有炎性细胞浸润;西药组大鼠结肠上皮结构和黏膜组织结构尚完整,腺体排列较规则,黏膜及黏膜下层仍有较多的炎性细胞浸润。 2.大鼠血清细胞因子芯片检测结果 在检测的34中细胞因子蛋白中,与正常组比,模型组大鼠血清中MCP-1、ThymusChemokine-1、Agrin、LIX、MMP-8、B7-2/CD86、RAGE、beta-NGF、CINC-1、CINC-2alpha、Fas Ligand蛋白表达均显著升高(P<0.01或P<0.05),VEGF、MIP-3 alpha蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比,西药组大鼠血清中MCP-1、Thymus Chemokine-1、Agrin、LIX、MMP-8、RAGE、CINC-1、CINC-2 alpha、Fas Ligand、表达均显著升高(P<0.01或P<0.05),VEGF、MIP-3 alpha蛋白表达显著降低(P=0.01和P<0.01);艾灸组MCP-1、Thymus Chemokine-1、Agrin、LIX、MMP-8、RAGE、CINC-1、CINC-2 alpha、Fas Ligand、、beta-NGF表达均显著降低(P<0.01或P<0.05),VEGF和MIP-3 alpha表达均显著升高(P<0.01)。 3.差异细胞因子蛋白生物功能和通路分析 (1)与正常组比,模型组大鼠血清中差异细胞因子涉及参与的生物过程有细胞生理过程、应激反应、免疫系统反应过程、发展过程、生物调节、细胞迁移、定位、凋亡过程、细胞成分的组成或生物合成、多细胞生物过程、生物粘附等;涉及的分子功能有分子结合、受体活性;细胞组分有细胞外区、细胞部分、细胞器、细胞外基质;涉及的通路有CC趋化因子受体相互作用通路、趋化因子信号通路、移植物抗宿主反应通路。 (2)与模型组比,艾灸组大鼠血清差异细胞因子蛋白涉及参与的生物过程有细胞生理过程、应激反应、免疫系统反应过程、发展过程、生物调节、细胞迁移、定位、凋亡过程、新陈代谢过程、细胞成分的组成或生物合成、多细胞生物过程、生物粘附等;涉及的分子功能有分子结合、受体活性、核酸结合转录因子;细胞组分有细胞外区、细胞部分、细胞器、细胞外基质;涉及的通路有CC类趋化因子受体相互作用通路、移植排斥反应通路、JAK-STAT信号通路。 (3)与模型组比,西药组大鼠血清差异细胞因子蛋白涉及参与的生物过程中有细胞生理过程、应激反应、免疫系统反应过程、生物调节、发展过程、细胞迁移、定位、凋亡过程、生物粘附;涉及的分子功能有分子结合、受体活性;细胞组分有细胞外区和细胞外基质;涉及通路有CC趋化因子受体相互作用通路、趋化因子信号通路、NOD样受体信号通路。 (4)将正常组与模型组、模型组与艾灸组、模型组与西药组同时进行比较,同时满足两组以上P<0.05的因子有12个,分别为Agrin、beta-NGF、CINC-1、CINC-2 alpha、Fas Ligand、LIX、MCP-1、MIP-3alpha、MMP-8、RAGE、Thymus Chemokine-1、VEGF。PCA和聚类分析进一步表明筛选出的差异细胞因子在各组间是有差异的,其涉及参与的生物过程中有细胞生理过程、应激反应、免疫系统反应过程、发展进程、生物调节、细胞迁移、定位、凋亡过程、细胞成分的组成或生物合成、多细胞生物过程、生物粘附等;涉及的分子功能有分子结合、受体活性,细胞组分有细胞外、细胞部分、细胞器、细胞外基质;涉及的通路有CC趋化因子受体相互作用通路和趋化因子信号通路。 4.大鼠血清有显著差异细胞因子蛋白验证 对大鼠血清有显著差异的5种细胞因子蛋白进行ELISA验证,结果显示:与正常组比,模型组大鼠血清中MCP-1、Agrin、CLCX7、MMP-8、LIX的水平均较正常组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比,艾灸组和西药组大鼠血清中MCP-1、Agrin、CLCX7、MMP-8、LIX的水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与西药组比,艾灸组大鼠血清中MCP-1、Agrin、CLCX7、MMP-8、LIX的水平差异无统计学意义(P>0.05)。 结论: 1.艾灸可改善UC大鼠结肠黏膜形态学损伤,促进结肠组织修复。 2.UC大鼠血清存在多种异常表达的细胞因子蛋白,这些差异细胞因子涉及参与许多复杂的生物过程。艾灸和西药干预均可调节部分UC大鼠血清中异常表达的细胞因子蛋白,但涉及的相关通路和作用途径不尽相同。 3.趋化因子及其受体介导的信号通路在UC的发生发展中发挥重要作用,艾灸对UC的治疗作用可能与艾灸调节UC的趋化因子及其受体介导的信号通路有关。 4.艾灸治疗能显著下调UC大鼠血清中MCP-1、Agrin、CXCL7、MMP-8、LIX的表达水平,这可能是艾灸治疗UC的重要作用机制之一。