人白介素-12转基因马铃薯体系外源基因表达的遗传稳定性和安全性分析

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目的:利用本室培育的人白细胞介素-12(human interleukin12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12转基因马铃薯体系外源基因表达的遗传稳定性和安全性问题。 方法:(1)培育连续3-4代转基因马铃薯,PCR扩增检测hIL-12基因:(2)Western Blot和ELISA法检测连续3代转基因马铃薯体系中hIL-12基因表达情况;(3)ELISA测定hIL-12诱使外周血单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ的量和MTT法检测hIL-12体外抗肿瘤作用来检测连续3代转基因马铃薯体系中各代产生的hIL-12的生物学活性:(4)通过PCR扩增生活在种植转基因马铃薯土壤中蚯蚓DNA,并用ELISA测定土壤和蚯蚓体内hIL-12蛋白含量分析hIL-12基因是否转移到环境中;(5)用转基因马铃薯、非转基因马铃薯和普通饲料分别喂养大鼠14天后,做组织切片观察大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器有无病变。 结果:(1)连续3代转基因马铃薯中含有和rhIL-12位置相同的条带,野生对照的无此条带;(2)转基因马铃薯和rhIL-12标准品在35kD处有条带出现,野生对照组无此条带出现;转基因马铃薯各代系产生的hIL-12的量与野生对照组比较有显著性差异;(3)hIL-12能使PBMC产生IFN-γ,其含量与野生对照组相比有显著性,加了抗体以后有明显的抑制作用;hIL-12对肺癌A549细胞的杀伤活性与野生对照组、空白对照组相比有显著差异。(4)种植转基因马铃薯土壤中生活的蚯蚓体内并无hIL-12基因转入:土壤和蚯蚓中的hIL-12含量与野生对照组相比无差异性。(5)食用转基因马铃薯、非转基因马铃薯与普通饲料的大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑切片,HE染色后观察无异常。 结论:(1)本课题组建立的hIL-12转基因马铃薯表达体系各代系中hIL-12基因能稳定遗传,而且各代转基因植株提取的hIL-12蛋白表达量和生物学活性稳定。(2)本课题建立的hIL-12转基因马铃薯中hIL-12基因没有漂移到土壤环境和蚯蚓中,转基因马铃薯无食用毒性。
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