论文部分内容阅读
目的：研究BCR-ABL和VEGF反义寡核苷酸联用对K562细胞株的作用及其相互作用的影响。 方法：设计针对bcr3/abl2和VEGF的反义寡核苷酸（AS-ODNs），应用脂质体OligofeclamineTM Reagent作为转染载体。在转染后48小时测定bcr3/abl2和VEGFmRNA水平的变化：转染后72小时进行台盼蓝染色活细胞计数；应用无血清培养、低剂量VP-16和STI571作为凋亡诱导剂，应用MTT方法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡；建立裸鼠K562移植瘤动物模型，瘤内注射AS-ODNs或同时口服格列卫，观察肿瘤体积生长变化，组织学检测肿瘤血管密度和肿瘤细胞凋亡情况。 结果：1．转染后48小时，ASO-B3／A2、ASO-VEGF均可使bcr3/abl2基因和VEGF基因表达降低，两种反义核酸半量联合应用，可达到同样结果。 2．转染后72小时，各实验组与空白组相比，细胞计数法显示细胞增殖抑制率分别为：13.47％（ASO-B3／A2组），12.79％（ASO-VEGF组）和41.55％（半量联合治疗组）。 3．转染后24小时，继续无血清和加入0.1UM STI571培养24小时后， MTT法显示联合治疗组细胞增殖抑制明显。与对照组相比，活细胞比例分别为：①．无血清处理组：88.10±2.01％（ASO-B3／A2组），88.48±2.97％（ASO-VEGF组），68.40±1.97％（半量联合治疗组）。 ②．STI571处理组：89.997±0.95％（STI571组），74.68±2.51％（STI571+ASO-B3／A2组），73.03±1.77％ （STI571+ASO-VEGF组），56.96±4.10％（STI571+半量联合治疗组）。 4．转染后24小时，继续含/无血清、加入5μM VP-16或0.1μMSTI571培养24小时后，流式细胞仪检测Annexin-V表达情况。与对照组相比，不同实验组Annexin-V的表达比例分别为：①．含血清处理组：各实验组无差别。②．无血清处理组：7.93±1.40％（ASO-B3／A2组），7.86±1.75％（ASO-VEGF组），15.56±4.47％（半量联合治疗组）。③．5μM VP-16处理