功能性便秘是常见病和多发病,而随着社会的发展,人们的生活方式、饮食习惯、精神压力等因素的改变,其发病率逐渐增高,严重影响患者的生活质量。目前关于便秘的治疗方式多种多样,我院普外科在国内率先开展了诸如生物反馈、粪便移植、益生菌和可溶性膳食纤维等内科及创新发明“金陵术”的外科治疗方式治疗功能性便秘,虽然取得一定疗效,但由于目前国内外对于功能性便秘的发病机理尚不完全明确,仍存在诸多问题。结肠平滑肌的运动需要包括肠神经系统、神经递质、Cajal间质细胞、平滑肌细胞及其他细胞共同协调完成。目前国内外关于功能性便秘机理主要集中于“肠神经功能紊乱”的系列研究中,而平滑肌具有一定自主节律性,其运动并不完全受神经因素调控。因此,肠神经功能的调控可能并不是功能性便秘机体结肠动力的唯一治疗途径。寻求肠神经系统以外新的治疗靶点可能为功能性便秘提供新的、更为安全和有效的治疗途径。Cajal间质细胞是胃肠道的起搏细胞,cajal间质细胞的缺失或减少是假性肠梗阻、先天性巨结肠和溃疡性结肠炎等肠道动力异常性疾病的重要因素,而目前有研究发现,TMEM16A特异性的表达于cajal间质细胞中,并且是cajal间质细胞网络改变的可靠和敏感指标,它可能通过cajal间质细胞而影响胃肠道的动力。我们推测,在功能性便秘患者中TMEM16A的表达可能存在异常,且TMEM16A可能通过调控ICC进行结肠平滑肌运动功能的调节。在本研究中,我们采用免疫荧光染色、RT-PCR以及Western-blot技术检测TMEM16A在顽固性功能性便秘患者结肠中的表达,同时检测cajal间质细胞的特异性标志物c-kit在顽固性功能性便秘患者结肠中的表达,并分析二者结果的相关性,以期为临床顽固性功能性便秘患者的诊断和治疗寻找新的靶点提供理论依据。第一部分顽固性功能性便秘患者结肠中TMEM16A的表达目的:研究TMEM16A在顽固性功能性便秘患者结肠中的表达情况。方法:(一)选取顽固性功能性便秘患者30例作为实验组,结肠癌患者30例作为对照组,分别采用免疫荧光染色、RT-PCR以及Western-blot技术检测TMEM16A在结肠中的表达。(二)选取顽固性功能性便秘患者100例,并根据便秘患者的年龄、便秘病程的不同、是否合并糖尿病分成3个亚组,分别采用RT-PCR以及Western-blot技术检测TMEM16A在结肠中的表达。结果:与对照组相比,实验组结肠TMEM16A的免疫荧光的表达、m RNA的表达、蛋白含量均明显减少;年龄越大,TMEM16A的表达越少;便秘病程越长,其表达越少;合并糖尿病的患者,TMEM16A的表达明显低于不合并糖尿病者。结论:顽固性功能性便秘患者结肠中TMEM16A蛋白和基因的表达明显下降,年龄越大、便秘病程越长,TMEM16A表达越少;此外,合并糖尿病的患者TMEM16A的表达量也明显低于不合并糖尿病者。第二部分顽固性功能性便秘患者结肠中c-kit的表达目的:研究c-kit在顽固性功能性便秘患者结肠中的表达情况,并分析其与TMEM16A的相关性。方法:(一)选取顽固性功能性便秘患者30例作为实验组,结肠癌患者30例作为对照组,采用RT-PCR以及Western-blot技术检测c-kit在结肠中的表达;并采用免疫荧光染色法同时检测c-kit及TMEM16A在结肠中的表达。(二)选取顽固性功能性便秘患者100例,并根据便秘患者的年龄、便秘病程的不同、是否合并糖尿病分成3个亚组,分别采用RT-PCR以及Western-blot技术检测c-kit在结肠中的表达。结果:顽固性功能性便秘患者结肠中c-kit蛋白和基因的表达明显下降,年龄越大、便秘病程越长,c-kit表达越少;此外,合并糖尿病的患者c-kit的表达量也明显低于不合并糖尿病者。c-kit与TMEM16A在结肠的表达分布一致。结论:顽固性功能性便秘患者结肠中c-kit蛋白和基因的表达明显下降,年龄越大、便秘病程越长,c-kit表达越少;此外,合并糖尿病的患者c-kit的表达量也明显低于不合并糖尿病者。c-kit与TMEM16A在结肠的表达具有一致性。