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背景:糖原合成激酶3β(GSK3β)是一种多功能的蛋白激酶,具有多种活化方式,并参与多种信号通路。在肿瘤的发生、发展过程中具有重要作用。GSK3β对肿瘤的影响,成为目前研究的热点,有可能成为骨肉瘤潜在治疗的靶点。 骨肉瘤是最常见的原发性恶性肿瘤,好发于青少年,由于恶性程度高,早期发生肺转移,5年生存率低,严重威胁患者生命。在手术治疗辅助化疗的基础上,分子靶向治疗作为一种新型治疗手段成为治疗骨肉瘤的新的发展方向。本研究小组在前期实验结果证明:GSK3β在患者骨肉瘤组织中的表达明显高于正常骨组织,推断OSK3β与骨肉瘤的关系密切,但在骨肉瘤中GSK31~担当怎样的角色,目前研究尚不清楚。本实验以多种骨肉瘤细胞为研究对象,通过GSK3]3特异性抑制剂,研究其在骨肉瘤细胞中的作用。 目的:研究糖原合成激酶3β(Glycogen synthesis kinase-3β,GSK-3β)抑制剂对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响,为进一步研究OSK3β在骨肉瘤细胞中的作用机制奠定基础。 方法:(1)MTT法检测两种GSK-3p特异性抑制剂对骨肉瘤细胞系MG-63、HOS、SaoS-2细胞增殖抑制率的影响。(2)流式细胞仪检测GSK3β特异性抑制剂作用后三种骨肉瘤细胞周期、凋亡的变化。 结果:(1)MTT法检测显示,与对照组比较,实验组明显抑制骨肉瘤细胞的增殖(P<0.05),并表现出明显的时间、剂量依赖性,与对照组比较,GSK3β抑制剂浓度从5 umol/L增加到50 umol/L,肿瘤细胞生长抑制率明显增高(P<0.05)。(2)流式细胞技术对药物作用后骨肉瘤细胞的周期分析结果表明,经过OSK31~的特异性抑制剂AR-A014418作用后,3种骨肉瘤细胞实验组与对照组相比,处于G0/G1期细胞比例减少,G2/M期细胞比例增多,并可见S期细胞比例增多(P<0.05);细胞凋亡结果显示:经AR-A014418作用骨肉瘤MG-63细胞早期凋亡率:3.79%±0.31%(P<0.05),晚期凋亡率:17.51±0.29(P<0.05),较对照组增高;AR-A014418作用骨肉瘤细胞HOS细胞早期凋亡率0.49%±0.21%(P>0.05),晚期凋亡率10.10%±0.30(P<0.05),高于对照组细胞凋亡率;AR-A014418作用Saos.2细胞后检测细胞凋亡率,早期凋亡:16.06%±0.46(P<0.05),晚期凋亡率:38.73%±1.56%(P<0.05),均明显高于对照组。 结论:在骨肉瘤细胞中,GSK-3β生物活性的抑制,可降低肿瘤细胞增殖速度,诱导骨肉瘤细胞的凋亡,阻滞细胞周期的进程。