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背景与目的:乳腺癌是全球女性癌症相关死亡的第二大原因,近年发病率持续上升。转移和复发是乳腺癌患者死亡的主要原因,严重危害患者生命健康。转移性乳腺癌易复发、预后差,生存期仅8个月至3年。因此,探寻转移相关的关键分子对提高转移性乳腺癌患者的生存率具有重要意义。非肌肉肌球蛋白ⅡA（Non-muscle myosin ⅡA,NMⅡA）是细胞的肌动蛋白骨架之一,与细胞的迁移、收缩以及胞质分裂等密切相关。近年研究发现,NMⅡA可以促进细胞（包括癌和非癌细胞）迁移,在乳腺癌的转移中起着重要作用,但其确切的分子机制尚不明确。最新研究发现,NMⅡA重链S1943的磷酸化对于癌细胞的入侵尤为关键,但迄今尚无文献报道NMⅡA的重链磷酸化在乳腺癌迁移中的作用及其机制。因此,本课题旨在研究NMⅡA是否通过重链磷酸化促进乳腺癌转移,并探讨其分子机制。方法:1.免疫组织化学法测定原发性、转移性乳腺癌及癌旁组织中NMⅡA的表达差异;Western blot和免疫荧光法测定乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231和MCF-7/MX细胞中NMⅡA的表达差异。2.Western blot和免疫荧光法测定MCF-7、MDA-MB-231和MCF-7/MX细胞中磷酸化的NMⅡA（p-NMⅡA）的表达差异;在MCF-7/MX细胞过表达NMⅡA野生型及重链磷酸化位点突变型,G418筛选多克隆细胞株,选用空白组（Control）、阴性对照组（Vector）、NMⅡA野生型过表达组（NMⅡA-WT）、重链磷酸化位点突变的NMⅡA过表达组（NMⅡA-S1943A）做后续实验;用免疫荧光法和Western blot法鉴定其过表达效果和效率;Transwell迁移及侵袭实验测定上述各组细胞的迁移及侵袭能力。3.球形成实验测定Control、Vector、NMⅡA-WT和NMⅡA-S1943A各组细胞的成球能力;克隆形成实验测定上述各组细胞的克隆形成能力;Western blot测定各组细胞中的CSCs（Cancer stem cells,CSCs）标记物的表达差异。4.Western blot测定Control、Vector、NMⅡA-WT和NMⅡA-S1943A各组细胞中的非磷酸化的（active）β-catenin及β-catenin的表达差异;Western blot和免疫荧光法测定各组细胞中activeβ-catenin的表达差异;用Wnt通路抑制剂ICG-001（5、10μM）处理MCF-7/MX 1d后,Western blot测定Wnt通路相关蛋白、NMⅡA、p-NMⅡA和CSCs标记物的表达变化。结果:1.NMⅡA在转移性乳腺癌和高侵袭性乳腺癌细胞高表达。与癌旁正常组织相比,NMⅡA蛋白在原发性乳腺癌中表达上调（p<0.001）,在转移性乳腺癌中表达进一步上调（p<0.001）;与乳腺癌MCF-7细胞相比,NMⅡA蛋白在高侵袭性MDA-MB-231细胞中上调（p<0.05）,在MCF-7/MX细胞中下调（p<0.05）。2.NMⅡA的重链磷酸化促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。与MCF-7细胞相比,高侵袭性MDA-MB-231细胞中的p-NMⅡA蛋白上调（p<0.05）,MCF-7/MX细胞中的p-NMⅡA蛋白下调（p<0.05）;与Control组相比,NMⅡA-WT组（p<0.01）和NMⅡA-S1943A组细胞中NMⅡA的表达水平上调（p<0.001）;与Control组相比,NMⅡA-WT组中的p-NMⅡA蛋白上调（p<0.05）、NMⅡA-S1943A组细胞中的p-NMⅡA蛋白下调（p<0.05）;与Control组相比,NMⅡA-WT组细胞的迁移（p<0.01）和侵袭能力均显著增强（p<0.001）,NMⅡA-S1943A组细胞的迁移和侵袭能力均显著减弱（p<0.001）。3.NMⅡA的重链磷酸化增强乳腺癌细胞的干性。与Control组相比,NMⅡA-WT组细胞的成球和克隆形成数均增加（p<0.05）,NMⅡA-S1943A组细胞的成球（p<0.01）和克隆形成数均减少（p<0.05）;且与NMⅡA-WT组相比,NMⅡA-S1943A组细胞的成球和克隆形成数均显著减少（p<0.001）;与Control组相比,NMⅡA-WT组细胞的CSCs标记物（Sox2、Oct4、Klf4）表达上调（p<0.01）;与NMⅡA-WT组相比,NMⅡA-S1943A组细胞的CSCs标记物表达下调（p<0.01,p<0.05,p<0.001）。4.NMⅡA的重链磷酸化与Wnt/β-catenin通路形成反馈环路。与Control组相比,NMⅡA-WT组细胞中activeβ-catenin及Wnt通路下游增殖蛋白Survivin的表达上调（p<0.05）;与NMⅡA-WT组相比,NMⅡA-S1943A组细胞的activeβ-catenin（p<0.01）、Survivin（p<0.01）和c-Myc蛋白表达均明显减少（p<0.001）;Wnt通路抑制剂ICG-001（5、10μM）明显抑制了activeβ-catenin、β-catenin、p-NMⅡA、NMⅡA和CSCs标记物表达（p<0.05;p<0.001）。结论:1.NMⅡA促进乳腺癌转移。2.NMⅡA通过重链磷酸化促进乳腺癌转移。3.NMⅡA重链磷酸化与Wnt/β-catenin通路形成反馈环路增强乳腺癌细胞干性促进转移。