鸡产蛋下降综合征病毒(Egg drop syndrome virus, EDSV)属于腺病毒科禽腺病毒属Ⅲ群(Avian adenovirus Group Ⅲ)。该病毒主要引起产蛋下降及卵壳形成不全等临床症状。李刚等于1991年分离到EDSV NE4株,从而证实了EDS在我国的存在。该病毒与牛腺病毒、羊腺病毒DNA具有高度同源性,而与Ⅰ型禽腺病毒的DNA没有同源性,推测EDSV可能是介于哺乳动物腺病毒和禽腺病毒之间的病毒类群。本论文针对鸡产蛋下降综合征病毒主要展开以下三部分研究：一是TaqMan荧光实时定量PCR检测鸡产蛋下降综合征病毒方法的建立及应用；二是鸡产蛋下降综合征病毒NE4株的动物回归试验；三是该毒株对小鼠感染特性的初步研究。1.建立了TaqMan荧光实时定量PCR检测鸡产蛋下降综合征病毒方法：根据GenBank公布的EDSV六邻体蛋白基因的高度保守序列,设计了2对特异性引物和1条TaqMan探针。以构建的阳性重组质粒为标准品,构建标准曲线,建立了一种快速检测鸡产蛋下降综合征病毒的TaqMan荧光实时定量PCR方法。该方法最小检出量达10copies/μL,在1.0×102～1.0×108copies/μL检测范围间有良好的线性关系,具有较好的敏感性、特异性、稳定性和重复性。与普通PCR相比,用荧光实时定量PCR检测受感染鸡群产蛋分离物中病毒的方法具有更高的灵敏度,为鸡产蛋下降综合征病毒的进一步研究奠定了基础。2.鸡产蛋下降综合征病毒NE4毒株进行动物回归试验,对鸡群进行抗体水平检测,并对分离样本中病毒含量进行监测：以106TCID50攻毒量的EDSV NE4株对10只120日龄罗曼鸡进行人工感染试验,同时设置自然感染组及阴性对照组。对临床症状及蛋鸡产蛋率进行监测发现,人工感染组没有明显的临床表现,产蛋率可下降至80%,自然感染组出现典型的产蛋异常,产蛋率下降至40%,阴性对照组临床表现正常；对攻毒后鸡群的卵黄抗体及血清抗体水平进行监测,结果显示人工感染与自然感染均可使鸡产生高达212的抗体,阴性对照组鸡群体内并未检测到抗体；用荧光定量PCR方法对鸡群所产蛋及排出粪便进行病毒检测,结果显示攻毒后第7d开始直至监测结束,可在人工感染组鸡群的粪便及蛋中检测到病毒,自然感染组鸡群所产软壳蛋中亦可检测到,阴性对照组鸡群受检样本检测为阴性。本次的动物回归试验证明了NE4株仍具有感染性,可使动物机体产生高滴度HI抗体并向外排毒,可通过水平传播自然感染健康鸡并使其产生高滴度HI抗体。3.鸡产蛋下降综合征病毒NE4毒株对小鼠感染特性的初步研究：本文首次探索性地用106TCID50攻毒量的EDSV NE4株对4-6周龄的KM小鼠进行攻毒试验,同时以正常尿囊液接种作为阴性对照。对小鼠的临床表现及血清抗体水平进行监测发现,攻毒可使小鼠产生特异性的抗体,并对其采食有一定影响,血清中HI抗体滴度可高达212,阴性对照组小鼠体内抗体检测为阴性；用荧光定量PCR对小鼠组织中的EDSV进行检测,结果显示在攻毒后小鼠大部分组织器官如肝脏、子宫、肾脏、肺脏、脾脏、心脏、肠、食管、气管、脑与攻毒后7d-63d粪便中均可检测到EDSV,而被检组织在攻毒后不同时间EDSV的含量有所不同,阴性对照小鼠所有受检组织中均未检测到病毒；用纯化后的EDSV免疫新西兰白兔,将获得的高免血清用Protein A亲和层析柱纯化后,得到纯度及效价较高的抗EDSV多克隆抗体；用纯化的多抗结合免疫组化法对小鼠组织中的EDSV进行定位,结果显示攻毒后不同时间,在子宫、肺脏、肝脏、肾脏中可检测到阳性信号,最为典型的定殖位置是子宫腺体上皮细胞及肌层细胞的胞浆中,说明EDSV可在小鼠的组织中定殖。通过上述研究初步推测,EDSV NE4株可以感染KM小鼠。