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目的:建立一种基于S-Poly(T)plus的实时荧光定量PCR法,为检测血清miR-122和miR-199提供更为灵敏且便捷的方法,并探讨其在肝细胞癌诊断中的应用价值。方法:1.设计S-poly(T)plus法扩增miRNA的特异性引物和探针;2.建立S-poly(T)plus荧光定量PCR法检测组织和血清miRNA,并对实验条件进行优化,确立其线性范围,进行灵敏度、重复性等方法学评价;3.选择2017年2月至2017年12月福建医科大学附属第一医院住院初诊为肝细胞癌的患者50例,作为实验组,同时选择性别、年龄与实验组相匹配,各项体检结果正常且无肿瘤家族史的健康人为对照组。采用S-poly(T)plus荧光定量PCR法检测各组血清miR-122和miR-199表达水平,与Poly(A)加尾法比较,并进行ROC曲线分析;4.根据实验组AFP水平分为A组(AFP<20ng/ml),B组(20400ng/ml)三个亚组,分析血清miR-122和miR-199表达水平与AFP水平的相关性。结果:1.建立一种基于S-poly(T)plus荧光定量PCR检测micro RNA的方法。采用S-poly(T)plus法和Poly(A)加尾法检测micro RNA,测得各组Ct值分别为:实验组miR122(26.73±2.48)和(32.84±2.28)(P<0.05),对照组miR122(27.87±2.66)和(32.12±1.84)(P<0.05),实验组miR199(33.62±1.6)和(34.53±1.13)(P>0.05),对照组miR199(30.71±3.21)和(35.25±0.83)(P<0.05),实验组cel-miR-54(29.43±1.37)和(33.79±0.77)(P<0.05),对照组cel-miR-54(31.88±2.39)和(33.38±0.61)(P<0.05),以上对应组两两比较结果表明S-poly(T)plus法灵敏度高于Poly(A)加尾法。2.S-poly(T)plus法批间CV值为2.59%,小于Poly(A)加尾法的3.52%。S-poly(T)plus法线性相关系数R~2(0.984)大于Poly(A)加尾法R~2(0.957)。3.采用S-poly(T)plus法检测实验组和对照组miR-122和miR-199的相对表达量,得出实验组miR-122(10.89±11.99),对照组miR-122(2.11±3.26),肝细胞癌患者血清中miR-122水平显著高于健康志愿者,P<0.01。而实验组mi R-199(0.2±0.2),对照组miR-199(0.92±0.93),肝细胞癌患者血清中miR-199水平显著低于健康志愿者,P<0.01。4.ROC曲线分析得出miR-122的的曲线下面积(AUC)为0.82(95%CI 0.732-0.908,P<0.001,cut-off为1.32,诊断敏感性为81.6%,特异性为68.2%),而miR-199的曲线下面积(AUC)为0.807(95%CI 0.714-0.900,P<0.001,cut-off为0.226,诊断敏感性为73%,特异性为71.4%)。5.血清miR-122表达水平在A、B、C各实验亚组间随着AFP的增加呈逐渐升高的差异表达,(P<0.05)。血清miR-199表达水平在A、B、C各实验亚组间随着AFP的增加呈逐渐降低的差异表达,各组相比较P<0.05。结论:1.建立了基于S-poly(T)plus荧光定量PCR检测micro RNA的方法,该法相比于Poly(A)加尾法灵敏度较高,重复性较好。2.血清miR-122和miR-199与AFP水平有一定的相关性,有望成为肝细胞癌辅助诊断指标。