双酚A对雄性斑马鱼(Danio rerio)脂肪代谢影响的研究

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双酚A(BPA)是水环境中广泛分布的一种环境激素类污染物,BPA对哺乳动物脂肪代谢的影响已有报道,而截至目前尚未见到关于BPA对鱼类脂肪代谢的研究。鱼类脂肪代谢关系到食品安全、鱼类自身健康和经济效益。当前环境因素对鱼类脂肪代谢的影响尚未得到充分的研究。为了解BPA对鱼类脂肪代谢的影响,本研究选择模式动物斑马鱼(Danio rerio)为研究对象。由于性别和年龄会对鱼类脂肪代谢造成影响,故本研究选取成年雄性斑马鱼。本研究有利于人们充分的认识环境因素对于鱼类脂肪代谢的影响;此外,还有利于人们更加全面的认识BPA对水生动物的内分泌毒性。本研究分为三个阶段进行,主要包括:1.首先用4种浓度BPA (50μg/L、200μg/L、1000μg/L、2000μg/L)对雄性斑马鱼暴露5周,测定各组织脂肪含量,然后选取其中作用效果最为显著的两个浓度组(200μg/L、2000μg/L)的肝脏样品,利用Illumina Hisseq2000测序平台对样品测序并进行转录组学分析。结果表明:BPA会引起鱼体肝脏与肌肉的脂肪积累,但无剂量-效应关系,转录组学分析结果显示两种浓度BPA处理都导致斑马鱼胰酶分泌增多,从而促进脂肪消化与吸收。2.为进一步阐明两种浓度(200μg/L、2000μng/L)的BPA对脂肪代谢影响,本研究用两种浓度BPA对雄性斑马鱼暴露5周,检测组织脂肪含量,并用荧光定量PCR (QRT-PCR)检测脂肪代谢相关基因的表达量。结果表明:组织脂肪含量结果同第一阶段相似。两种浓度的BPA对脂肪代谢相关基因表达的影响相似,均引起了FAS、DGAT1b、DGAT2的显著性上调(P<0.05);此外两种浓度均引起了VTG基因表达的上调,其中高浓度组有显著性差异(P<0.05)。3.由于转录组结果显示在中脂饲料饲养下BPA会促进斑马鱼的胰酶分泌及促进脂肪的消化与吸收。为了解在不同脂肪含量饲料饲养下,BPA是否都有类似的现象与机制以及BPA和饲料脂肪的协同效应。本研究又分别选取三种不同脂肪含量(1.17,6.98,13.11%)饲料饲养斑马鱼,同时分别进行对照处理与BPA暴露。从生化、分子、组织学层面对各组斑马鱼脂肪代谢进行观察。结果表明:三种饲料饲喂下BPA处理均引起斑马鱼肝脏脂肪积累,其中低脂组还引起了内脏脂肪积累、中脂组还引起了肌肉的脂肪积累。肝脏组织学切片结果显示,三种饲料饲喂下BPA处理均引起了肝脏出现了脂肪空泡。基因检测显示,在中脂组与高脂组,BPA处理会导致FAS与DGAT2基因显著上调(P<0.05),然而低脂组BPA处理却引起了FAS基因的显著下调(P<0.05)。结论:本研究首次发现并提出了BPA会诱导斑马鱼胰酶上调从而促进对外源脂肪的吸收,此外,BPA处理还引起了FAS及DGAT基因的上调从而促进内源脂肪的合成,这些可能是BPA处理导致斑马鱼脂肪代谢紊乱并造成体脂积累的基本代谢机理。此外,本研究也显示,不同脂肪含量饲料的摄入及不同浓度的BPA引起的脂肪积累表型及机制不尽相同,有待进一步研究。
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