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研究背景:肝移植是治疗终末期肝脏疾病的有效治疗手段,脑死亡器官捐献(Donation after brain death,DBD)早已无法满足日益增加的供肝需求,而心脏死亡器官捐献(Donation after cardiac death,DCD)是解决供肝短缺的重要渠道。缺血再灌注(Ischemia reperfusion,IR)损伤是指器官在缺血后恢复灌注,出现损伤不但没有减轻反而进一步加重的情况;IR损伤是导致移植术后移植肝无功能以及急慢性排除反应发生的重要危险因素,与DBD肝脏相比,DCD肝脏具有更长的热缺血时间,在移植过程中对IR损伤更加敏感。研究目的:IR损伤过程中出现的无菌炎症反应是导致组织损伤的重要原因,高迁移率族蛋白1(High mobility group box 1,HMGB1)是具有参与DNA修复,转录以及细胞信号转导等重要功能的核蛋白,与TLR4结合可以诱导固有免疫,参与多种疾病的病生过程。本研究旨在探究HMGB1/TLR4信号通路在大鼠DCD供肝的IR损伤中的影响及机制。研究方法:使用TLR4特异性抑制剂TAK242。SD雄性大鼠随机分为4组:对照组,给药组,DCD组,DCD给药组。根据分组给予TAK242或者DMSO生理盐水预处理,并根据分组确定热缺血时间,肝脏获取后保存在4℃UW液24小时,然后使用大鼠肝脏离体灌注系统进行灌注1小时,获取灌注液及组织标本。通过HE染色,肝酶水平检测肝组织损伤情况,使用Tunel法检测肝细胞凋亡情况,通过组织MDA,ROS水平,电镜观察亚细胞结构检测组织氧化应激程度,使用荧光定量PCR和Western blot检测HMGB1,TLR4和下游炎症因子表达水平和蛋白水平。结果:DCD组肝脏的组织损伤,肝酶水平,凋亡率明显高于对照组正常肝脏且HMGB1,TLR4,以及下游炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α,COX2的表达水平和蛋白水平均高于对照组。阻断TLR4通路明显减轻了DCD肝脏组织损伤情况,肝酶水平和肝细胞凋亡率;降低了DCD肝脏TLR4和下游炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α,COX2的表达水平和蛋白水平,但对DCD肝脏的HMGB1表达和蛋白水平无明显影响。阻断TLR4通路后DCD肝脏的组织损伤,肝酶水平和肝细胞凋亡率以及HMGB1,TLR4,以及下游炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α,COX2的表达水平和蛋白水平仍要高于阻断TLR4通路后的正常肝脏。阻断TLR4通路对大鼠正常供肝无明显影响,肝脏组织损伤,肝酶水平,肝细胞凋亡率以及通路相关因子的表达和蛋白水平与大鼠正常肝脏均无明显差异。结论:本实验表明TLR4信号通路在大鼠DCD肝脏的IR损伤中发挥重要作用,TAK242通过阻断TLR4信号通路减轻了大鼠DCD的IR损伤,对改善DCD供肝质量可能具有潜在的帮助。