不同补料发酵策略对地衣芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶影响

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β-甘露聚糖酶是自然界中广泛分布、以甘露聚糖为底物的半纤维素酶,可应用于食品、医药、纺织及石油开采等工农业生产领域。本文以一株分离自亚麻温水沤麻液的β-甘露聚糖酶高产菌株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheiformis)HDYM-04为供试菌株,对其补料发酵的条件进行了优化,确定了补料发酵过程中碳源和氮源的初始加入量和补加量,并建立了分批发酵动力学模型。本研究为该菌株应用于工业化生产奠定了试验基础。本文首先在摇瓶水平对碳源、氮源种类进行了初筛,并对初始加入量、补加时机、补加量进行了优化。后又在5 L发酵罐水平对摇瓶水平得出的最优实验条件进行了扩大试验。摇瓶水平获得较优的碳源材料为魔芋粉和葡萄糖,试验获得菌株HDYM-04发酵最优条件为:葡萄糖初始加入量为0.5%(w/v),其最高酶活力为284.47土 11.59 U/mL;魔芋粉初始加入量1%(w/v),其最高酶活力可达695.86士23.42U/mL;初始加入0.5%(w/v)葡萄糖和1%(w/v)魔芋粉,其最高酶活力可达789.07±25.82 U/mL。在酶活力降低点补加1%(w/v)魔芋粉,最高酶活力为1533.26±33.74 U/mL;在还原糖降低点补加0.5%(w/v)葡萄糖,最高酶活力为966.53 ± 27.84 U/mL;分别在上述两点补加,其最高酶活力可达2238.14土33.65 U/mL,较未补加时提高了约1.84倍。较优的氮源材料为NH4N03和酵母粉,试验获得菌株HDYM-04发酵最优条件为:NH4N03初始加入量为1%(w/v),其最高酶活力为642.45±25.45U/mL;酵母粉初始加入量为0.5%(w/v),其最高酶活力为1191.59土43.14 U/mL;在酶活力降低点补加0.5%(w/v)酵母粉,最高酶活力为2832.32±49.14U/mL。在5L发酵罐水平,碳源优化并流加后酶活为2238.14±33.65U/mL;氮源优化并流加后酶活为3052.78±38.14 U/mL;碳源和氮源均优化流加后酶活力为3321.64 ±27.94 U/mL。本研究优化了地衣芽孢杆菌HDYM-04在摇瓶和5 L发酵罐中生产β-甘露聚糖酶的补料发酵条件,优化后发酵罐水平最高酶活力可达3321.64± 27.94U/mL,较初始仅加入魔芋粉时提高了 3.77倍。为菌株HDYM-04的工业化应用奠定了理论基础,提供了实践指导。
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