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目的:通过研究γ射线胸部照射早期(3h至14d)小鼠肺组织及肺引流淋巴结(Lung Draining Lymph Nodes,LDLN)中白细胞、T淋巴细胞(T lymphocytes,TLC)及其亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Treg)、树突状细胞(dendritic cells,DC)、巨噬细胞(Macrophages,M?)等免疫细胞及其表面分子的变化,探讨电离辐射早期致肺部T淋巴细胞及抗原提呈的变化。研究结果可为放射性肺损伤机制和早期干预措施提供依据。方法:1.动物实验:(1)照射方式:建立小鼠胸部照射模型:将280只C57BL/6雄性小鼠(6-8周,20±2g),随机分为14组(7个对照组,7个照射组),每组20只。照射组用60Coγ射线进行单次胸部20Gy照射。(2)原代细胞的提取和检测:分别在照射后第3h、12h、1d、2d、3d、7d和14d,放血后处死小鼠,取肺和引流淋巴结,剪碎后用胶原酶消化分离,并置于40μm细胞筛网过滤,分别得到肺和肺引流淋巴结单细胞悬液,细胞标记抗体后采用流式细胞术检测照射后不同时间细胞表面标志物的变化,主要检测抗原提呈细胞及其细胞表面的共刺激因子和T细胞亚群的变化。2.体外共培养实验:(1)小鼠支气管上皮细胞(MLE-12)照射后与小鼠脾细胞共培养,分别在3h、6h、24h标记抗体,采用流式细胞术检测不同时间T细胞及其表面共刺激分子的变化。(2)MLE-12照射后与小鼠骨髓分化的树突状细胞(DC)共培养,分别在6h、24h、48h标记抗体,采用流式细胞术检测不同时间DC细胞表面标志物(CD11C、CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ)的变化。结果:1.照射小鼠肺组织白细胞显著降低(P<0.05);CD3+T细胞在照射后早期(3h2d)减少,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);CD4+T与CD8+T细胞均呈现波动性变化,但存在明显的时相差异,CD4+T细胞在照射后早期(3h和12h)即显著减少(P<0.05),1 d后波动性回复至对照组水平;CD8+T细胞在照射后早期(3h和12h)无明显变化,1 d和3 d降低明显(P<0.05),7d后显著增高(P<0.05);与此相对应的CD4+/CD8+比值在照射后早期(1d内)和后期(7d后)均明显下降(P<0.05),期间出现明显的波动性增高(P<0.05);Treg均明显高于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05);DC细胞比例在照射后各个时间点均明显高于对照组(P<0.05);照射小鼠肺组织CD80的表达在3h3d明显升高(P<0.05),7d后CD80的表达回复到正常水平;DC表面CD86的表达,在12h7d均高于对照组(P<0.05);DC表面MHCI的表达在早期(3d内)高表达(P<0.05);DC表面MHCII的表达,在3h336h均低于对照组(P<0.05);巨噬细胞(M?)在照射后没有变化(P>0.05);M?表面CD80的表达在2d明显升高(P<0.05),3d回复到正常水平;M?表面CD86的表达在3d内明显升高(P<0.05),3d后CD86的表达回复到正常水平(P>0.05);M?表面MHCII的表达在2d7d明显降低(P<0.05),14d后MHCII的表达回复到正常水平。2.与对照组相比,照射小鼠引流淋巴结白细胞显著降低(P<0.05),14d有明显的回复,但仍低于对照组(P<0.05);照射后3h7d,CD3+T淋巴细胞显著升高(P<0.05),14d的时候回复到对照水平(P>0.05);照射后CD4+T呈现波动性变化,但存在明显的时相差异,CD4+T细胞在照射后早期(3h和12h)即显著减少(P<0.05),1 d7d高于对照组水平(P<0.05),14天回复至对照水平(P>0.05);CD8+T细胞在照射后早期3h无明显变化(P>0.05),12h7d降低明显(P<0.05),14d回复至对照水平(P>0.05)。与此相对应的CD4+/CD8+比值在照射后早期(1d内)和后期14d均没有变化(P>0.05),1d7d明显高于对照组(P<0.05);Treg比例在24h14d均明显高于对照组;与对照组相比,DC在对照水平以上呈波动性变动,3h、7d照射组和对照组无差异(P>0.05),12h3d,14d照射组高于对照组(P<0.05);照射组DC表面CD80、CD86的表达,在12h-14d均高于对照组(P<0.05);DC表面MHCI的表达在早期(12h)以及7d、14d均高表达(P<0.05);DC表面MHCII的比例,在12h7d均低于对照组(P<0.05)。3.脾细胞与MLE-12体外共培养,CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞表面CD28表达在6h和24h均高于对照组(P<0.05);DC与MLE-12体外共培养,DC在照射后6h48h均高表达,DC表面标记分子CD80/86,MHCI/II在照射后6h均高表达(P<0.05)。结论:胸部照射小鼠早期肺部T细胞呈现不同的变化,可能与辐射诱导的免疫细胞损伤及机体应激反应产生的免疫应答有关;DC细胞增多,DC表面共刺激因子CD80、CD86和MHCI持续高表达,表明辐射激活肺部DC抗原提呈能力;体外共培养实验初步探讨了照射诱导抗原提呈的机制,推测照射通过诱导肺上皮细胞损伤激活DC抗原提呈进而活化T细胞。