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目的:
miRNA在多种肿瘤中都有异常表达,它通过调控其靶基因的表达进而发挥抑癌基因或癌基因的作用,与肿瘤的发生密切相关。但目前有关miRNA与卵巢癌耐药性相关的研究尚属起步阶段。为此,本研究应用miRNAs芯片筛查卵巢癌顺铂耐药细胞株(COCl/DDP)及其敏感株(COCl)差异表达的miRNAs。挑选其中上调的两个miRNAs即miR-141-3P和miR-195-5P进行RT-PCR验证。探讨COCl/DDP和COCl中miRNAs的差异表达与人卵巢癌顺铂耐药的关系。
方法:
1.利用miRNA芯片技术比较COCl和COCl/DDP细胞的miRNAs表达差异。利用TRIzol(R)Reagentrmg抽提分离总RNA与ExiqonmiRNA基因芯片杂交,采用AxonGenePix4000Bmicroarrayscanncr扫描仪进行芯片扫描获得图像,使用GcnePixproV6.0软件提取数据后进行数据分析。
2.根据表达谱结果,挑选差异表达的miRNA中的两个(miR-195-5p、miR-141-3p)采用Real-time-PCR法检测上述COCl/DDP和COCl细胞中表达情况进一步验证miRNA基因芯片的结果。
结果:
1.利用miRNA芯片技术,在COCl和COCl/DDP细胞株中,共检测了1800个以上的microRNAs分子(芯片包含所有有机体和病毒microRNAs探针)。发现其中有4个microRNAs分子表达显著降低,13个microRNAs分子表达显著升高。
2.Real-time-PCR结果显示,miR-141-3p在COCl中相对表达量为(1.7833±0.7213),在COCl/DDP中相对表达量为(14.0433±4.4895)在二者之间有显著差异(P＜0.05)。miR-195-5p在COCl中相对表达量为(0.82±0.2163),在COCl/DDP中相对表达量为(4.66±0.7869)在二者之间有显著差异(P＜0.05)。
结论:
1.microRNAs微陈列技术可以用于高通量的筛选miRNA。
2.COCl/DDP与COCl间存在差异表达的miRNAs分子。
3.将芯片结果与荧光定量Real-time-PCR结果进行比较,结果显示miR-141-3p和miR-195-5p在COCl/DDP组织中表达上调,miRNA芯片与定量RT-PCR的结果一致,说明本研究芯片结果真实可靠,miR-141-3p和miR-195-5p可能在卵巢癌耐药过程中发挥重要作用,通过microRNA表达初步研究,为进一步实验打下基础。