目的：　　 用含壳聚糖、Ⅰ型胶原蛋白和rhBMP-2的培养液体外培养成骨细胞MC3T3-E1，以评价这三种因素对成骨细胞增殖分化作用的影响。　　 方法：　　 1、细胞复苏与传代　　 从液氮罐中取出含有小鼠成骨细胞系MC3T3-E1冻存管，使之在1分钟内解冻融化，并接种于细胞培养瓶中。放入37℃，5％ CO2恒温培养箱中培养。细胞在培养瓶中长满至单层后，进行传代。　　 2、采用MTT检测法筛选适宜成骨细胞增殖的最大壳聚糖浓度　　 配制0.5、1、2、5和10mg/mL五种不同浓度的壳聚糖培养基，分别为实验组A、B、C、D和E，对照组为含1％FBS的α-MEM培养基，用MTT检测法观察加入处理因素后48小时成骨细胞的增殖情况。　　 3、采用MTT检测法观察壳聚糖及其复合物对成骨细胞的增殖作用　　 一共有三个实验组，分别为实验组A: CSα-MEM培养基;实验组B:CS+Ⅰ型胶原蛋白溶液的α-MEM培养基;实验组C:CS+Ⅰ型胶原蛋白溶液+rhBMP-2溶液的α-MEM培养基。对照组为含1％FBS的α-MEM培养基。检测加入处理因素后的1、3、5、7天的OD值，并绘制细胞生长曲线。　　 4、采用碱性磷酸酶活性测定、碱性磷酸酶染色和茜素红钙结节染色观察壳聚糖及其复合物对成骨细胞的分化作用　　 分组同上，检测加入处理因素后的1、3、5、7天的碱性磷酸酶活性，并在细胞培养的第7天进行碱性磷酸酶染色，第14天进行茜素红钙结节染色。　　 5、统计处理　　 所得数据采用SPSS13.0软件包进行统计分析，采用单因素方差分析，两组之间的比较采用Post Hoc检验，α=0.05为统计学检验水准，P＜0.05时有统计学差异。　　 结果：　　 1、在含壳聚糖培养基中，当壳聚糖浓度达到1mg/mL时，细胞OD值最大，与对照组及其他实验组间的两两比较具有显著性差异(P＜0.05)，提示我们壳聚糖可以促进成骨细胞的增殖，浓度适宜，增殖结果最大。　　 2、成骨细胞在含CS、Ⅰ型胶原蛋白溶液和rhBMP-2溶液的培养基中，OD值高于其他组。实验组C与其他组间的两两比较具有显著性差异(P＜0.05)，提示壳聚糖、Ⅰ型胶原蛋白溶液和rhBMP-2溶液共同作用，可以更好的促进成骨细胞的增殖。　　 3、成骨细胞在含CS、Ⅰ型胶原蛋白溶液和rhBMP-2溶液的培养基中，碱性磷酸酶活性高于其他组。实验组C与实验组A、对照组间两两比较具有显著性差异(P＜0.05)，与实验组B的两两比较间无显著性差异(P＞0.05)，提示壳聚糖、Ⅰ型胶原蛋白溶液和rhBMP-2溶液共同作用，更有利于成骨细胞的分化。　　 4、与对照组相比，实验组C可以看到更多的钙盐沉积，且蓝染颗粒多于其他组。　　 结论：　　 不同浓度的壳聚糖可以促进成骨细胞的增殖，而1mg/mL时为最适浓度，加入Ⅰ型胶原蛋白和rhBMP-2，三者共同作用比单纯应用壳聚糖更能促进成骨细胞的增殖分化。