miR-9501和miR-1247-5p在非小细胞肺癌中的表达及功能研究

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肺癌(lungcancer)是严重影响人们健康的恶性肿瘤之一,它的发病率和死亡率随着医疗检测技术的革新呈现上升趋势。最新的全球疾病负担研究表明,在亚洲,肺癌是导致寿命损失的五大原因之一。肺癌高居不下死亡率的主要原因在于肺癌的恶性度进展快,同时缺乏有效的早期诊断标准。数据显示,超过75%的患者在确诊肺癌时已丧失了最佳的治疗时机。MicroRNA(miRNA)是长约19-25个核苷酸的小分子单链RNA,在机体内不编码任何蛋白质,它可以调节相关基因的表达,主要为抑制作用。miRNA可与其靶标基因的mRNA上的3,UTR区的序列互补配对,影响靶基因mRNA的翻译。越来越多的研究表明,miRNA参与机体内众多生理和病理过程的调控,包括细胞增殖、分化、发育、死亡、凋亡、炎症及肿瘤发生与转移等。本研究分为两个部分,第一部分对肺癌组织的小RNA测序分析发现的新miRNAchr929897(miR-9501)的功能进行研究,发现,miR-9501 的表达在 NSCLC组织和肺癌细胞中均显著降低,我们通过RNA折叠软件预测了 miR-9501的二级结构,我们用脂质体2000转染miR-9501的类似物进入肺腺癌A549细胞,通过CCK-8和EdU增殖实验检测miR-9501对肺癌细胞增殖能力的影响;通过细胞划痕实验和transwell迁移实验研究miR-9501对肺癌细胞迁移能力的影响;采用Hoechst和Annexin-V FIT C/PI染色检测miR-9501对肺癌细胞凋亡水平的影响。实验结果表明,miR-9501过表达可抑制肺癌细胞增殖和迁移能力,并且降低凋亡水平。并且,我们通过miR-9501抑制剂转染来验证结论。研究结果预示,miR-9501可作为肺癌的抑癌基因来发挥功能。第二部分我们研究了 miR-1247-5p在肺癌中的作用。根据本课题组前期小RNA测序的结果,我们发现miR-1247-5p在肺癌组织中低表达,通过RT-PCR我们在大量组织和细胞中进行了验证,证实了 miR-1247-5p在肺癌组织和肺癌细胞中表达均下调。我们研究了 miR-1247-5p在肺癌细胞中的作用。CCK8和EdU增殖实验表明,miR-1247-5p可以抑制肺癌细胞增殖;Transwell迁移实验提示,miR-1247-5p可以抑制肺癌细胞迁移;Hoechst染色和Annexin-VFITC/PI染色结果表明,miR-1247-5p可以促进肺癌细胞的凋亡。因此,miR-1247-5p在肺癌中起抑癌作用。
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