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目的:研究白藜芦醇、阿司咪唑、非索非那定对小檗碱引起的APD延长的逆转作用。 方法:(1)采用全细胞膜片钳技术,在培养的乳鼠原代心室肌细胞实验中,研究不同浓度的小檗碱孵育后对动作电位时程的影响;(2)采用全细胞膜片钳技术,在急性分离的豚鼠心室肌细胞实验中,研究小檗碱孵育后对豚鼠心室肌细胞动作电位时程的影响;(3)采用肢体导联心电图技术,研究小檗碱灌胃给药后对豚鼠QT间期的影响;(4)采用Western Blot技术,研究小檗碱和白藜芦醇、阿司咪唑、非索非那定对hERG通道蛋白表达的影响;(5)采用全细胞膜片钳技术,在稳定表达hERG通道的HEK293细胞中,研究小檗碱和白藜芦醇、阿司咪唑、非索非那定对hERG通道电流的影响;(6)采用全细胞膜片钳技术,在培养的乳鼠原代心室肌细胞实验中,研究小檗碱和白藜芦醇、非索非那定共孵育给药后对动作电位时程的影响;(7)采用全细胞膜片钳技术,在急性分离的豚鼠心室肌细胞实验中,研究小檗碱和白藜芦醇共孵育给药后对动作电位时程的影响。 结果:(1)1、10、30μmol/L小檗碱延长原代乳鼠心室肌细胞的动作电位时程(APD),呈剂量依赖性,APD50由空白组5.6±0.52ms(n=6)经孵育后1、10、30μmol/L的小檗碱分别延长到15.27±6.0ms(P<0.05,n=6),22.27±3.41 ms(P<0.01,n=6),33.5±2.46ms(P<0.001,n=6);APD90由空白组21.07±2.32ms(n=6)经孵育后1、10、30μmol/L的小檗碱分别延长到91.2±14ms(P<0.01,n=6),102.83±27.45ms(P<0.01,n=6),140.5±4.8ms(P<0.001,n=6)。(2)10μmol/L小檗碱延长豚鼠心室肌细胞动作电位时程,APD50和APD90由给药前301.4±34.8ms(n=4),353.8±15.8ms(n=4)延长到926.1±204.5ms(P<0.001,n=4),972.2±195.2(P<0.001,n=4)。(3)27.1mg/kg的小檗碱灌胃给药120mi后可延长豚鼠QT间期,由0.2821±0.0090ms(n=5)延长到0.3255±0.0154ms(P<0.05,n=5)。(4)10μmol/L白藜芦醇、5μmol/L阿司咪唑、1nmol/L非索非那定孵育后可逆转10μmol/L小檗碱对hERG通道蛋白表达的抑制。10μmol/L白藜芦醇、1nmol/L非索非那定孵育后能够逆转10μmol/L小檗碱诱导的hERG尾电流下降,拯救率分别为11.47%、13.43%。5μmol/L阿司咪唑不能逆转由10μmol/L小檗碱引发hERG通道电流的减少。(5)10μmol/L白藜芦醇可缩短由小檗碱引起乳鼠原代心室肌细胞APD的延长,APD50和APD90由给予小檗碱药物后27.32±4.26ms(P<0.001,n=6),135.25±28.81 ms(P<0.001,n=6)缩短至8.83±1.73ms(P<0.001,n=6),42.33±9.29ms(P<0.001,n=6),拯救率为88.17%;1 nmol/L非索非那定也可缩短由小檗碱引起的原代乳鼠心室肌细胞APD的延长,APD50和APD90由给予小檗碱药物后27.32±4.26ms(P<0.001,n=6),135.25±28.81 ms(P<0.001,n=6)缩短至8.45±1.81ms(P<0.001,n=6),37.83±7.29ms(P<0.001,n=6),拯救率为92.31%。(6)小檗碱(10μmol/L)孵育给药后可延长豚鼠心室肌细胞的APD,APD50和APD90分别由给药前308.43±18.82ms(n=4),385.45±23.71 ms(n=4)延长到841.68±154.86ms(P<0.001,n=4),891.95±151.72ms(P<0.001,n=4);10μmol/L白藜芦醇可缩短由小檗碱引起的APD延长APD50和APD90分别缩短到478.6±20.18ms(P<0.01,n=4),549.33±14.6ms(P<0.01,n=4),拯救率为65.58%。 结论:小檗碱孵育可以延长乳鼠原代心室肌细胞和豚鼠心室肌细胞的动作电位时程,且小檗碱还可在体延长豚鼠QT间期。白藜芦醇、非索非那定可以逆转小檗碱对hERG通道蛋白及电流的抑制作用,并能够逆转心室肌细胞动作电位时程的延长作用。阿司咪唑仅可逆转小檗碱对通道蛋白的抑制作用。