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目的研究HMGB1基因对下咽癌细胞上皮间质转化和侵袭转移的影响,并尝试探讨HMGB对于这一过程的调控机制,以期为临床上治疗下咽癌提供新靶点。方法1、利用TGF-β1诱导下咽癌细胞(Fa Du)发生EMT,并通过检索文献[1-2]确定最佳诱导浓度。将Fa Du细胞分为Normal组和TGF-β1组,显微镜下观察Fa Du细胞经TGF-β1诱导后的形态变化。通过细胞免疫荧光实验检测各组细胞中Vimentin、Snail、HMGB1的表达情况,以RT-PCR和Western Blot方法检测HMGB1蛋白和基因在经TGF-β1诱导前后的Fa Du细胞中的表达情况;2、利用脂质体法将siRNA-HMGB1和siRNA-Control转染至FaDu细胞(分为Normal组、Control组和si HMGB1组),用细胞免疫荧光、RT-PCR和Western Blot检测si RNA对HMGB1的抑制作用。采用细胞免疫荧光观察Vimentin、Snail、HMGB1的表达情况,采用RT-PCR方法分析Vimentin、Snail、E-cadherin的表达水平;Western Blot方法分析转染后下咽癌Fa Du细胞中RAGE蛋白表达变化;应用创伤愈合实验检测Fa Du细胞迁移能力的改变,Transwell实验观察HMGB1基因沉默后Fa Du细胞侵袭能力变化。结果1、Fa Du细胞经过TGF-β1诱导后,细胞形态由规则的路砖状转变为长梭形;细胞免疫荧光结果显示,TGF-β1组Fa Du细胞中的Vimentin、Snail表达上调;.2、细胞免疫荧光结果显示,TGF-β1组细胞中的HMGB1表达升高,同时HMGB1在m RNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)水平的表达也呈现上调现象;3、si RNA-HMGB1转染Fa Du细胞后可在m RNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)水平抑制HMGB1的表达;4、细胞免疫荧光结果显示,转染siRNA-HMGB1后细胞中的Vimentin、Snail表达水平降低;5、RT-PCR结果显示,转染si RNA-HMGB1后细胞中的Vimentin(P<0.05)、Snail(P<0.01)基因表达下调,而E-cadherin(P<0.05)表达上调;6、Western Blot结果显示,转染si RNA-HMGB1后细胞中的RAGE蛋白表达下调(P<0.01);7、创伤愈合实验结果显示,si RNA-HMGB1转染Fa Du细胞后,Fa Du细胞的迁移能力显著下降;8、Transwell实验结果显示,si RNA-HMGB1转染Fa Du细胞后,Fa Du细胞的侵袭能力明显降低(P<0.01)。结论1、可以通过TGF-β1诱导构建下咽癌细胞的EMT模型,HMGB1的表达与下咽癌细胞EMT形成相关;2、利用RNAi技术沉默HMGB1的表达可逆转下咽癌细胞EMT;3、利用RNAi技术沉默HMGB1的表达后,下咽癌细胞Fa Du的侵袭转移能力明显受抑;4、HMGB1可通过与RAGE相互作用调控下咽癌的侵袭转移;5、HMGB1基因可能为临床治疗下咽癌提供新的分子靶点。