论文部分内容阅读
目的：1.研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓CD34+CD59+与CD34+CD59-细胞促红细胞生成素受体(EPOR)和血小板生成素受体(TPOR)的表达及经EPO/TPO刺激后,受体后信号传导通路JAK-STAT途径中STAT5磷酸化(P-STAT5)水平。2.研究PNH患者骨髓CD34+CD59+和CD34+CD59-细胞凋亡受体FAS和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达区别,探讨PNH患者异常克隆细胞抗凋亡能力增强的机制。方法：1.应用流式细胞术分别检测26例PNH患者和16名正常对照者骨髓CD34+CD59+和CD34+CD59-细胞EPOR、TPOR的表达情况。2.应用RT-PCR方法分别检测25例PNH患者和13名正常对照者骨髓单个核细胞(BMMNC) EPOR、TPORmRNA的表达。3.应用流式细胞术分别检测23例PNH患者及11名正常对照者BMMNC经和不经10U/mlEPO、50U/mlTPO刺激后CD34+CD59-和CD34+CD59+细胞P-STAT5平均荧光强度(MFI)。4.应用流式细胞术分别检测25例PNH患者和15名正常对照者骨髓CD34+CD59+和CD34+CD59-细胞凋亡受体FAS(CD95)、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。结果：1.①PNH患者骨髓CD34+CD59+细胞EPOR表达率为(30.67±18.30)%,明显高于CD34+CD59-细胞(8.05±3.51)%(p<0.01)及对照组CD34+CD59+细胞(8.24±6.51)%(p<0.01),但PNH患者骨髓CD34+CD59-细胞EPOR表达率与对照组CD34+CD59+细胞比较无明显差别(p>0.05)。②PNH患者骨髓CD34+CD59+细胞TPOR表达率为(28.15±17.75)%,明显高于CD34+CD59-细胞(15.65±14.45)%(P<0.05)及对照组CD34+CD59+细胞(10.77±8.39)%(p<0.01),但PNH患者骨髓CD34+CD59-细胞TPOR表达率与对照组CD34+CD59+细胞比较无明显差别(p>0.05)。2.PNH患者BMMNC EPORmRNA、TPORmRNA表达水平分别为(0.41±0.37)、(0.32±0.19),对照组BMMNC EPORmRNA、TPORmRNA表达水平为(0.47±0.33)、(0.40±0.29),两者比较,差别均无统计学意义(p>0.05)。3.①未加入细胞因子刺激组,PNH患者CD34+CD59-细胞P-STAT5的MFI为(30.53±14.64),明显低于CD34+CD59+细胞(74.19±47.38)(p<0.01)与正常对照组CD34+CD59+细胞(59.39±23.48)(p<0.05)；但PNH患者CD34+CD59+细胞P-STAT5的MFI与正常对照组CD34+CD59+细胞比较差别无统计学意义(p>0.05)②加入EPO刺激组,PNH患者CD34+CD59-细胞P-STAT5的MFI为(49.19±24.03),明显低于CD34+CD59+细胞(119.51±82.15) (p<0.01)及正常对照组CD34+CD59+细胞(78.63±47.02) (p<0.05),PNH患者CD34+CD59+细胞P-STAT5的MFI与正常对照组CD34+CD59+细胞比较差别无统计学意义(p>0.05)③加入TPO刺激组,PNH患者CD34+CD59-细胞P-STAT5的MFI为(51.15±41.24),明显低于CD34+CD59+(?)细胞(123.75±86.90)(p<0.05)及正常对照组CD34+CD59+细胞(97.66±53.25)(p<0.05),PNH患者CD34+CD59+细胞P-STAT5(?)(?)MFI与正常对照组CD34+CD59+细胞比较差别无统计学意义(p>0.05)；④加入EPO刺激后,PNH患者CD34+CD59+细胞P-STAT5的增高程度(即刺激后PNH患者CD34+CD59+细胞P-STAT5的MFI与未刺激组PNH患者CD34+CD59+(?)田胞的P-STAT5的MFI差值)为(49.12±10.61),明显高于CD34+CD59-细胞(17.11±4.23)(p<0.01)；⑤加入TPO刺激后,PNH患者CD34+CD59+细胞P-STAT5的增高程度为(54.40±43.26),明显高于CD34+CD59-细胞(16.21±5.79)(p<0.01)4.①PNH患者骨髓CD34+CD59+细胞CD95表达率为(55.56±25.30)%,明显高于CD34+CD59-细胞(33.34±29.28)%(P＜0.01)及对照组CD34+CD59+细胞(33.45±18.68)%(p<0.01),但PNH患者骨髓CD34+CD59-细胞CD95表达率与对照组CD34+CD59+细胞比较,差别无统计学意义(p>0.05)②PNH患者骨髓CD34+CD59+细胞Bcl-2表达率(56.67±17.67)%明显高于CD34+CD59-细胞(41.71±24.67)%(p<0.05),但与正常对照组CD34+CD59+细胞(49.85±18.20)%比较,差别无统计学意义(p>0.05)。PNH患者CD34+CD59-细胞Bcl-2表达率与正常对照组CD34+CD59+细胞比较,差别无统计学意义(p>0.05)。结论：1.PNH患者骨髓CD34+CDC9+细胞EPOR、TPOR表达明显高于异常克隆造血干细胞,该差别可能源于受体基因转录后表达异常。PNH患者CD34+CD59+细胞的基础及EPO/TPO刺激后P-STAT5的水平均明显高于CD34+CD59-细胞,这提示PNH患者应用EPO、TPO治疗后,正常克隆造血干细胞增殖分化能力明显优于异常克隆造血干细胞。2.PNH患者骨髓CD34+CD59+细胞凋亡受体FAS和抗凋亡蛋白Bcl-2表达数量均高于CD34+CD59-细胞,推测PNH异常克隆细胞抗凋亡能力增强可能与其表面凋亡受体表达减少有关,不涉及Bcl-2表达异常。