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沙门氏菌作为一种重要的人畜共患病原菌,在广泛而持续的抗菌药压力下,能够形成生物被膜以适应生存的需要。本研究旨在通过沙门氏菌生物被膜体外模型的建立,为探讨生物被膜的形成能力与沙门氏菌耐药性之间的关系以及为成膜菌感染的防治提供理论依据。
采用标准的琼脂稀释法和微量稀释法测定了10种抗菌药物对88株临床分离沙门氏菌的最小抑菌浓度,用PCR的方法对所有菌株进行了Ⅰ类整合子和2个毒力相关基因spvC和pefA的筛查;同时采用改良的结晶紫染色、银染法和扫描电镜法对菌株进行生物被膜形成能力的定量筛选和定性分析,并选定8株成膜能力较强的菌株,进行亚抑菌浓度下(1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC)抗菌药物(氨苄西林、头孢曲松、链霉素、卡那霉素、安普霉素、氯霉素、恩诺沙星、左氧氟沙星、利福平和多西环素)对其成膜能力影响的研究,以及恩诺沙星与红霉素以及替米考星对成膜菌DFR6的膜清除作用。
药敏实验结果表明:敏感菌占4株(4.55%),多重耐药菌占70株(79.55%)。其中氨苄西林耐药率为51.14%;头孢曲松未发现耐药;利福平耐药率为77.27%;恩诺沙星耐药率为47.73%;左氧氟沙星耐药率为68.18%;多西环素耐药率为62.5%;安普霉素耐药率为3.41%;链霉素耐药率为30.68%;卡那霉素耐药率为31.82%;氯霉素耐药率为59.09%。
PCR检测结果表明88株分离菌中Ⅰ类整合子的阳性率为71.59%,且Ⅰ类整合子的存在与沙门氏菌的耐药性和生物被膜的形成存在一定的相关性。2个毒力相关基因spvC和pefA的阳性率分别为69.32%和65.91%,同时携带两个基因的菌株占46.59%,但并未发现其与生物被膜的形成能力存在明显的相关性。
改良结晶紫染色结果表明88株沙门氏菌分成强成膜能力、中等成膜能力、弱成膜能力和无成膜能力四个表型,分别占27.27%,39.77%,26.14%和6.28%。快速银染方法和扫描电镜定性研究结果表明,沙门氏菌形成生物被膜后,形成一种浮游细菌和生物被膜细菌共同分布于同一生存空间内的特殊生长方式。
亚抑菌浓度抗菌药对生物被膜形成的影响结果表明在氨苄西林、头孢曲松、多西环素、链霉素亚抑菌浓度作用下,个别菌株生物被膜的产生会增强,而氟喹诺酮类通常会减弱生物被膜的生成。抗菌药物对生物被膜菌的清除作用结果表明使用256μg/mL的红霉素对于DFR6菌株无抑菌作用,但能使恩诺沙星的BECs值降低了8倍(16μg/mL),增强了其对生物被膜菌的清除能力,同时恩诺沙星与替米考星联合作用能增强对DFR6菌株生物被膜的清除能力。