番茄苗期黄化突变体lmyl的表型鉴定与遗传分析

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番茄(Solanum lycopersicum L.)是植物生长发育研究的模式作物之一,同时也是南北方广泛种植的一种重要蔬菜作物。番茄叶色是重要的农艺性状,叶色突变体可作为植物光合特性、叶绿体合成与降解研究的重要遗传材料,同时其也可以作为苗期标记性状用于品种纯度快速鉴定及杂交后代的筛选,在番茄新品种选育中有良好的应用前景。本研究以番茄苗期黄化突变体lmyl与其野生型为材料,对其园艺学性状、光合特性、遗传规律和基因鉴定等4个方面开展了研究,为探索叶色调控的分子机制提供研究基础,对于光合系统结构、功能基因组学和番茄遗传育种等方面研究工作具有一定的参考。取得的结果如下:(1)研究发现番茄苗期黄化突变体lmyl在苗期表现为子叶黄化,心叶黄绿色,而后期心叶逐渐转绿,与对照野生型性状表型趋向一致。(2)光合生理特征方面研究显示,番茄苗期黄化突变体lmyl生长早期叶片中叶绿素a、叶绿素b含量显著低于野生型,且突变体的叶绿体中类囊体的基粒片层和基质片层分化不完全,堆叠不整齐,且不清晰。生长后期,突变体叶片转绿,叶绿素含量和叶绿体结构也恢复正常。与此一致的是,生长早期突变体的净光合速率明显降低,而后期与野生型没有差异。(3)将番茄苗期黄化突变体lmyl与野生型“404”杂交获得F1代,进一步自交获得F2代,其中叶色黄化转绿突变体与叶色正常植株数量符合1:3的分离比,这证明该番茄叶色黄化转绿突变性状受隐性单基因控制。(4)利用混合群体分离分析法结合高通量测序技术(BSA-Seq),对番茄苗期黄化突变体lmyl调控关键基因进行基因定位,分析结果显示SNP与In Del差异位点主要集中在番茄3号染色体,其他染色体上仅有少量位点存在差异,将3号染色体超过阈值区域定位为首要候选区间。通过生物信息学分析在3号染色体上筛选得到2个候选基因,Solyc03g025700和Solyc03g026080。其中,Solyc03g025700基因编码一个PPR蛋白(Pentatricopeptide repeat-containing protein);Solyc03g026080编码一个Rhbdd2蛋白(Rhomboid domain-containing protein 2)。(5)构建了编码PPR蛋白的Solyc03g025700基因的CRISPR/Cas9敲除载体,获得了转基因敲除番茄植株。初步结果显示,单独敲除Solyc03g025700基因并未使得转基因植株表现突变表型,候选基因功能仍需要进一步验证。
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