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胰蛋白酶是消化酶的一种，属于丝氨酸蛋白酶家族，对鱼类食物蛋白质的消化具有重要的生理作用。胰蛋白酶来源于鱼类的胰脏、肠道和幽门盲囊。胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于鱼类胰脏中，被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活，分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。黄鳝是我国主要的名优淡水鱼类养殖品种之一，其营养丰富、肉质鲜美，进行规模化养殖具有广阔的发展前景。黄鳝胰蛋白酶的相关研究可为黄鳝饲养的饲料配给提供相关信息，也可为一直作为下脚料的黄鳝内脏的合理回收利用提供理论基础。可是到目前为止，还未见黄鳝胰蛋白酶分离纯化及其性质方面的研究报道。本研究主要是对黄鳝胰蛋白酶进行分离纯化，并对其动力学性质进行了分析研究，具体研究如下： 1．黄鳝胰蛋白酶的纯化研究 将黄鳝在冰盘上解剖，取出肝胰脏，用预冷单蒸水淋洗，再用纱布将其沥干，加入四倍体积的pH8.0 50mM Tris-HCl缓冲液（含0.02％叠氮化钠）中，用搅拌机打碎成稀糊状液。4℃静置过夜后离心（15000 g×40min），过滤取上清液。然后将胰蛋白酶粗提液在4℃按饱和度30％、40％、50％、60％、70％、100％逐步进行硫酸铵分级沉淀，确定出胰蛋白酶的最佳硫酸铵沉淀饱和度范围为30％～60％。收集30％～60％的硫酸铵沉淀，用适量的提取液溶解后，在同样的缓冲液中透析过夜。 离子交换填料采用Amersham公司的DEAE-SepharoseTM Fast Flow，装入层析柱（1.2×20cm）中，先用大约100ml的50mM、pH7.0 Tris-HCl缓冲液以8-10ml／min的速度平衡DEAE-SepharoseTM Fast Flow柱，然后将透析过夜后的酶液上柱于DEAE-sepharose Fast Flow离子交换层析柱，再用相同的缓冲液冲洗掉未结合的蛋白质。用50mM、pH7.0 Tris-HCl缓冲液（含0.1M NaCl、0.2M NaCl、0.3M NaCl、0.4M NaCl、0.5M NaCl）分别进行洗脱，收集具有胰蛋白酶活性的洗脱峰，进行下一步纯化。 亲和层析采用的是5mL HiTrap Benzamidine FF（high sub）亲和预装柱。先用5个柱床体积（25ml）pH8.0 0.05M Tris-HCl缓冲液（含0.5M NaCl）以2mL／min的流速平衡。待基线为0.02以下时，然后以2mL／min的流速上样。再用5-10个柱床体积的平衡液冲洗，洗去未吸附在亲和吸附剂上的杂质。经实验研究，选择用pH3.0 50mM甘氨酸-HCl亲和洗脱液以5mL／min的速度洗脱，收集具有胰蛋白酶活性的洗脱峰，每毫升加60-200ul pH 9.0 1M Tris-HCl调节其pH值，以保持酶的稳定。 用5％的浓缩胶和12％的分离胶进行SDS-PAGE电泳，黄胰蛋白酶呈现出单一条带。并测得胰蛋白酶的分子量约为26.8KDa。通过测定每一分离纯化步骤所得胰酶样品的活力及比活力（以TAME为底物），黄鳝胰蛋白酶的纯化倍数达到约900倍，比活力为538 U／mg，最终产率为14.6％。