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维持铁等离子的动态平衡是保证植物细胞功能正常的先决条件。烟酰胺合成酶在单子叶禾本科的缺铁胁迫应答反应中起着关键作用,它的催化产物烟酰胺(NA)是铁及其他二价金属离子在体内吸收和转运的重要载体,且能与Fe2+结合形成Fe2+-NA复合物,从而使植物在酸性土壤中免受铁毒害。本研究利用农杆菌介导法,将大麦烟酰胺合成酶基因NAS1 转入水稻台北309中,试图提高水稻对铁等逆境胁迫的耐受性。其主要研究结论如下:
(1)通过筛选、分化,共获得76株再生植株,其中有39株PCR 检测为阳性,阳性检出率为51.3%。PCR Southern 杂交和real-time PCR检测进一步确定大麦烟酰胺合成酶基因已经整合到水稻基因组中。
(2)转基因植株的金属元素含量都高于非转基因对照,间接说明大麦烟酰胺合成酶基因在水稻中正常表达。与非转基因植株相比,铜元素含量增加了15%,锌增加了80%,锰增加了31%,铁增加了44%。但是,铁、锰和锌元素在株系间增量差异较大。
(3)在干旱胁迫处理过程中,转基因植株的SOD 酶活性和脯氨酸含量都高于非转基因对照,证明烟酰胺合成酶基因对于提高水稻干旱胁迫耐受性具有一定的作用。
(4)利用实时荧光定量PCR 法对8 个转基因当代植株进行拷贝数的分析,结果显示:有1株为非转基因植株, 1 株拷贝数为1,3 株拷贝数为2,拷贝数为3、4、7的分别有1 个。