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目的:分别从分子、细胞及整体水平研究槲皮素对人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的多药耐药逆转作用及其作用机制,为提高肿瘤的临床化疗效果、改善病人预后寻找有效药物。方法:1. MTT法检测槲皮素的细胞毒性及其对B-MD-C1(ADR+/+)细胞化疗敏感性的影响。2.用不同浓度槲皮素分别处理B-MD-C1(ADR+/+)及B-MD-C1(wt)细胞72h后,采用AO/EB染色,荧光显微镜下检测细胞的凋亡情况。3.采用RT-PCR法检测不同浓度槲皮素对B-MD-C1(ADR+/+)细胞mdr 1、topoⅡα基因表达的影响。4.免疫细胞化学法检测不同浓度槲皮素作用后,B-MD-C1(ADR+/+)细胞多药耐药蛋白P-gp的表达变化。5.用共聚焦激光显微镜观察槲皮素作用前后,B-MD-C1细胞内外ADM的分布情况。6.流式细胞术检测槲皮素作用前后, B-MD-C1(ADR+/+)细胞topoⅡα的表达变化。7.建立荷瘤动物模型,分别给予槲皮素(Que)、ADM、Que+ADM处理10天,另设不作处理的对照组和野生型B-MD-C1(wt)细胞对照组,用药后每日观察裸鼠的精神、饮食、活动、粪便等情况;每隔2日用游标卡尺测量肿瘤最大长径(a)、横径(b),计算肿瘤体积(平均瘤体积=a×b2/2);收集肿瘤标本,经HE染色用显微镜观察移植瘤组织细胞形态学特点;免疫组织化学法检测移植瘤组织中P-gp、TopoⅡα、Fas、FasL、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:1.槲皮素对B-MD-C1(wt)细胞及B-MD-C1(ADR+/+)细胞的体外增殖反应均有显著抑制作用(P<0.05),并与槲皮素的作用时间和浓度呈明显依赖性,药物浓度越大,作用时间越长,抑制效应越强。对B-MD-C1(wt)细胞作用24h、48h、72h的IC50值分别为165.679±2.219、148.344±2.171、123.683±2.157μmol/L;对B-MD-C1(ADR+/+)细胞作用24h、48h、72h的IC50值分别为152.729±2.710、122.819±2.794、108.730±1.994μmol/L。2. ADM对B-MD-C1(ADR+/+)和B-MD-C1(wt)细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为27.56±0.66mg/L和2.07±0.22mg/L,经终浓度10、20、40μmol/L的槲皮素作用48h后,ADM对B-MD-C1(ADR+/+)细胞的IC50明显减小,分别为8.68±0.67、6.51±1.10、3.85±0.37 mg/L,其逆转耐药的倍数分别为9.12±0.32、10.29±0.60、11.46±0.18;5mg/L VRP作用48h后,ADM对B-MD-C1(ADR+/+)细胞的IC50、逆转倍数分别为2.76±0.26 mg/L、11.98±0.18。3. 40μmol/L及以下浓度的槲皮素作用于B-MD-C1细胞后,毒性较低,对细胞增殖的抑制率低于15%,经AO/EB染色荧光显微镜下观察未见大量细胞凋亡现象。4.槲皮素能够使B-MD-C1(ADR+/+)细胞mdr1基因及其编码蛋白P-gp表达水平明显下调,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。5.槲皮素能够增加B-MD-C1(ADR+/+)细胞内ADM的分布,恢复其对化疗药物的敏感性。6.槲皮素能够使B-MD-C1(ADR+/+)细胞topoⅡα基因及其蛋白表达水平明显上调,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。7. B-MD-C1(ADR+/+)细胞在裸鼠成瘤率(88.89%)明显高于B-MD-C1(wt)细胞(16.67%)(p<0.05)。槲皮素与ADM联合应用能够明显抑制B-MD-C1(ADR+/+)细胞移植瘤的生长(p<0.05)。HE染色结果显示,B-MD-C1(ADR+/+)及B-MD-C1(wt)细胞移植瘤均呈低分化腺癌,具有来源肿瘤细胞的组织学特点。免疫组化检测结果显示,对照组、槲皮素处理组、ADM治疗组及槲皮素联合ADM应用组裸鼠移植瘤细胞中,P-gp、Fas、FasL、Bax表达水平无显著性差异(p>0.05);单独应用槲皮素组及槲皮素联合ADM应用组裸鼠的肿瘤组织中bcl-2表达水平明显低于对照组及槲ADM单独应用组(p<0.05);单独应用槲皮素组及槲皮素联合ADM应用组肿瘤组织中TOPOⅡα表达水平明显高于对照组及ADM单独应用组(p<0.05)。结论:1.槲皮素能够在不对肿瘤细胞产生明显毒性的情况下,通过下调耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)mdr1基因及其编码蛋白P-gp的表达,恢复ADM在细胞内的正常分布,来增加耐药细胞对化疗药物的敏感性。2.槲皮素能够通过上调耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+) TopoⅡα基因及其蛋白表达、增加化疗药物的作用靶点来增强化疗药物的杀伤作用。3.槲皮素在体内可以通过上调肿瘤组织TopoⅡα蛋白表达、下调bcl-2蛋白表达等机制逆转肿瘤细胞的多药耐药。