论文部分内容阅读
目的:骨科大手术后深静脉血栓形成(deep vein thrombosis,DVT)发生率较高,是患者围手术期死亡的主要原因之一,也是医院内非预期死亡的重要原因。中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)与静脉血栓形成有关。本研究的目的是中性粒细胞胞外诱捕网与全髋关节置换术后患者近期肌间静脉血栓(muscular calf venous thrombosis,MCVT)形成的关系。方法:本研究对78例患者分别取术前、术后第1、3、6天枸橼酸抗凝的乏血小板血浆(血浆中血小板<10×10~9/L)。通过荧光染料法定量测定细胞外游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)浓度,同时检测患者外周血C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、D-二聚体(D-dimer,DD)、纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物(α2-plasmin inhibitor-plasmin complexes,PIC)、组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂1复合物(tissue plasminogen activator-inhibitor complexes,tPAI-C)、凝血酶-抗凝血酶复合物(thrombin-antithrombin complex,TAT)、血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM),同时随机选择20个入组患者术前血进行中性粒细胞培养,用佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)刺激中性粒细胞,之后进行细胞免疫荧光作为健康对照,然后观测时间点内6例MVCT患者的血栓组织进行组织免疫荧光检测。结果:人工关节置换术后第3天血浆cfDNA浓度显著升高(p<0.01),持续至术后第6天,且MCVT阳性组与阴性组无差异。通过Pearson相关性分析发现,术后第1天、第3天、第6天血浆cfDNA水平与中性粒细胞计数无相关性(r=0.32,0.04,0.07;p=0.78,0.97,0.95);术后第3天cfDNA水平与tPAI-C、TM正相关(r=0.54,0.41;p<0.01,p<0.01)。ROC显示术后第3天,血浆cfDNA(AUC 0.52,灵敏度21.74,特异度96.15)、D-dimer(AUC 0.60,灵敏度80.00,特异度40.38)、cfDNA联合D-dimer(AUC 0.64,灵敏度86.96,特异度29.41)。D-dimer高于原cut-off为0.5 mg/L EFU,则预示发生MCVT时纤溶系统激活。Logistic回归多元回归分析结果显示,术后第3天D-二聚体水平对术后MCVT的形成有独立的预测价值(OR=1.63,p=0.02)。体外,刺激人中性粒细胞可产生NETs;体内,血栓组织中存在大量NETs和白细胞。结论:MCVT患者存在不同程度血管内皮损伤及凝血与纤溶系统功能紊乱。(1)血浆cfDNA水平没有发生显著变化,表明cfDNA似乎不是MCVT事件的重要驱动因素。(2)血浆cfDNA不适合单独作为诊断MCVT的生物标志物cfDNA与D-dimer可配合使用使辅助诊断MCVT的真是可信度更高。(3)血栓局部存在NETs,说明NETs参与了MCVT的形成。