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三氯乙烯(Trichloroethylene, TCE)是工业上广泛使用的一种氯代烯烃,在工业上可以作为清洗剂、溶剂和去脂剂等。在操作过程中作业者除通过呼吸道吸入外,皮肤直接接触也非常常见。在我国职业性三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎(ODMLT)随着接触TCE人数的增多有上升趋势,已是我国职业卫生工作面临的一大课题。TCE引起的皮肤局部免疫反应是如何被放大,并导致严重损害机制目前不清。ODMLT发病机制,目前多认为是抗原特异性T淋巴细胞介导的迟发型Ⅳ型变态反应。但是,ODMLT的病情比一般变应原性化合物引起的Ⅳ型变态反应所表现的要严重许多。是什么原因造成ODMLT病人出现多器官、多系统受损的严重病情,目前仍然不清楚。IL-1,IL-6,IL-8,IL-10以及TNF-α都是与炎症反应有着密切关系的细胞因子,在炎症的免疫应答的各个阶段,这些细胞因子都发挥着巨大作用。为此,本研究从整体动物试验方面应用皮肤毒理学、细胞免疫学技术比较TCE诱导的免疫反应中细胞因子IL-1,IL-6,IL-8,IL-10以及TNF-α表达的差异,研究这些细胞因子在TCE诱导的免疫反应中的作用,探讨ODMLT病人产生严重免疫性损伤效应的机制。1研究目的本研究通过TCE致敏豚鼠,来比较TCE诱导的免疫反应中细胞因子IL-1,IL-6,IL-8,IL-10以及TNF-α表达的差异,研究这些细胞因子在TCE诱导的免疫反应中的作用,探讨ODMLT病人产生严重免疫性损伤效应的机制,为防治ODMLT提供新的思路和科学的理论依据。2方法选用体重250-300g/只白色雌性豚鼠,经适应性饲养一星期后,随机分成空白对照组、溶剂对照组、TCE试验7天组(T7D即第二次致敏前一天的动物)、TCE试验14天组(T14D即末次致敏前一天的动物)、TCE试验24小时组(T24h即末次致敏后24h的动物)、TCE试验72小时组(T72h即末次致敏后72h的动物)、DNCB24小时组(阳性对照,DNCB24h即DNCB处理后24h的动物)和DNCB72小时组(DNCB72hDNCB处理后72h的动物),用豚鼠最大反应试验(Guinea Pig Maximization Test, GPMT)方法建立模型。观察和记录受试区的皮肤反应情况并进行拍照,按表一对皮肤反应进行评分,按表1对受试样品进行致敏强度分级。处死豚鼠后,在无菌条件下迅速取下豚鼠背部皮肤,做成石蜡切片。用免疫组织化学方法检测试验豚鼠皮肤组织的IL-1、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α的表达水平,用SPSS13.0统计软件包对实验结果进行统计分析。3结果1、在皮肤致敏反应试验中,空白对照组和溶剂对照组均未见红斑或水肿, DNCB阳性对照组10只动物均出现红斑以及水肿反应,致敏率为100%;在TCE24h试验组的14只动物中有9只出现红斑敏感率为64.3%。2、TNF-α结果溶剂对照组跟空白对照组相比无统计学意义(P>0.05),T24h未致敏、T24h致敏、T72h致敏、DNCB24h和DNCB72h组同溶剂对照组相比有统计学意义(P<0.05), T24h致敏组同T24h未致敏组相比有统计学意义(P<0.05), T72h致敏组同T72h未致敏组相比有统计学意义(P<0.05),T24h致敏组同T72h致敏组相比无统计学意义(P>0.05),T24h致敏组同DNCB24h和DNCB72h组相比没有统计学意义(P>0.05)。3、IL-1结果溶剂对照组跟空白对照组相比无统计学意义(P>0.05),T24h致敏、T72h致敏、DNCB24h和DNCB72h组同溶剂对照组相比有统计学意义(P<0.05), T24h致敏组同T24h未致敏组相比有统计学意义(P<0.05), T72h致敏组同T72h未致敏组相比有统计学意义(P<0.05),T24h致敏组同T72h致敏组相比无统计学意义(P>0.05),T24h致敏组同DNCB24h和DNCB72h组相比没有统计学意义(P>0.05)。4、IL-6和IL-8结果溶剂对照组跟空白对照组相比无统计学意义(P>0.05),T24h未致敏、T24h致敏、T72h致敏、DNCB24h和DNCB72h组同溶剂对照组比无统计学意义(P>0.05), T24h致敏组同T24h未致敏组和T72h未致敏组相比无统计学意义(P>0.05), T24h致敏组同T72h致敏、DNCB24h和DNCB72h组相比无统计学意义(P>0.05)。5、IL-10结果溶剂对照组跟空白对照组相比无统计学意义(P>0.05),T24h致敏、T72h致敏、DNCB24h和DNCB72h组同溶剂对照组相比有统计学意义(P<0.05), T24h致敏组同T24h未致敏组相比有统计学意义(P<0.05), T72h致敏组同T72h未致敏组相比有统计学意义(P<0.05),T24h致敏组同T72h致敏组相比无统计学意义(P>0.05),T24h致敏组同DNCB24h和DNCB72h组相比有统计学意义(P<0.05)。4结论1、TCE在一定剂量下对豚鼠具有致敏作用,致敏率为64.3%。2、TNF-α和IL-1在致敏组和未致敏组之间有差异,可能在三氯乙烯药疹样皮炎中有着重要意义。3、IL-6和IL-8水平在各个组别之间没有差异,说明IL-6和IL-8可能不参与三氯乙烯药疹样皮炎免疫反应。4、IL-10水平在致敏组和未致敏组相比有差异,而且TCE致敏组和DNCB组相比有统计学意义,提示IL-10可能参与三氯乙烯药疹样皮炎免疫反应,且在三氯乙烯药疹样皮炎中有着重要意义。