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热应激是限制禽类生长发育的一个重要因素。热应激抑制肉鸡的免疫功能,影响肉鸡的生长发育,为肉鸡养殖带来经济损失。本论文首先研究了不同热应激时间对肉鸡胸腺和脾脏免疫性能的影响,进一步研究发现热应激通过诱发胸腺和脾脏的氧化应激产生而使其性能下降,最后通过检测热应激肉鸡胸腺和脾脏MMP和ATP水平,ABCG2、SVCT-2和MCU的表达,研究热应激引起免疫器官发生氧化应激的机理。明晰这些问题,可以为实际饲养过程中缓解肉鸡热应激提供理论基础。主要研究内容和结果如下:1.热应激对肉鸡胸腺和脾脏免疫性能的影响试验分为对照组(25±1℃),和热应激组(37±1℃),热应激持续2周。分别于热应激1周和2周后屠宰肉鸡,采集血液分离血清,收集胸腺和脾脏称重并通过HE染色进行组织形态学分析,进一步分析血清和组织免疫指标的变化。结果显示:在试验期,热应激组肉鸡表现为精神萎靡,张口呼吸,采食量减少。热应激1周和2周血清HSP70、HSP90和CORT水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。热应激1周胸腺绝对重量极显著升高(P<0.01),热应激2周胸腺绝对重量和器官指数均极显著降低(P<0.01);热应激1周和2周脾脏绝对重量和脾脏指数均无显著变化(P>0.05)。热应激后,胸腺皮质和髓质的分界不明显,胸腺内分布大小不等的坏死灶和空泡等;脾脏组织出血增多,脾脏实质中有散在的大小不等的坏死灶,白髓减少,脾小体不明显。随着热应激时间的延长,对结构损坏更为严重。热应激1周血清IL-6和TNF-α的水平均极显著升高(P<0.01),IL-10水平无显著变化(P<0.05);热应激2周血清IL-10水平显著降低(P<0.05),IL-6和TNF-α水平无显著变化(P>0.05)。热应激1周胸腺IL-6水平极显著升高(P<0.01),IL-10水平显著降低(P<0.05),TNF-α水平无明显变化(P>0.05);脾脏IL-10水平显著降低(P<0.05),IL-6和TNF-α水平无明显变化(P>0.05)。热应激2周胸腺IL-6水平显著升高(P<0.05),IL-10水平显著降低(P<0.05),TNF-α水平无明显变化(P>0.05);脾脏IL-10水平显著降低(P<0.05),TNF-α水平显著升高(P<0.05),IL-6水平无明显变化(P>0.05)。热应激1周胸腺Ig G和Ig M m RNA表达水平均无明显变化(P>0.05),脾脏Ig G和Ig M的m RNA表达水平均显著升高(P<0.05);热应激2周胸腺Ig G的m RNA相对表达水平显著升高(P<0.05),Ig M的m RNA表达水平无明显变化(P>0.05);脾脏Ig G和Ig M的m RNA表达水平均显著升高(P<0.05)。2.热应激对肉鸡胸腺和脾脏抗氧化性能的影响检测血清、胸腺和脾脏氧化应激指标(MDA、SOD、T-AOC、GSH-PX和H2O2)的变化。结果显示:热应激1周血清MDA水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-PX和T-AOC水平明显降低(P<0.05或P<0.01);胸腺MDA和H2O2水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-PX和T-AOC水平显著降低(P<0.05);脾脏MDA水平显著升高(P<0.05),GSH-PX水平显著降低(P<0.05),SOD、H2O2和T-AOC水平无明显变化(P>0.05)。热应激2周血清MDA水平极显著升高(P<0.01),GSH-PX和T-AOC水平显著降低(P<0.05),SOD水平无明显变化(P>0.05);胸腺MDA和H2O2水平极显著升高(P<0.01),GSH-PX水平显著降低(P<0.05),SOD和T-AOC水平无明显变化(P>0.05);脾脏MDA和H2O2水平明显升高(P<0.05或P<0.01),SOD、GSH-PX和T-AOC水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。3.热应激引起肉鸡免疫器官氧化应激发生的调节机制提取肉鸡胸腺和脾脏的线粒体后,检测MMP和ATP水平的变化,采用荧光定量PCR技术和Western Blot研究胸腺和脾脏ABCG2、SVCT-2和MCU的表达水平。结果显示:热应激1周和2周胸腺和脾脏MMP和ATP明显降低(P<0.05或P<0.01)。热应激1周胸腺ABCG2、SVCT-2和MCU m RNA和蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01);脾脏ABCG2 m RNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05),SVCT-2和MCU m RNA表达无明显变化(P>0.05),SVCT-2和MCU蛋白表达极显著升高(P<0.01)。热应激2周胸腺ABCG2 m RNA和蛋白表达无明显变化(P>0.05),SVCT-2 m RNA表达极显著升高(P<0.01),但SVCT-2蛋白表达无明显变化(P>0.05),MCU m RNA和蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01);脾脏ABCG2、SVCT-2和MCU m RNA和蛋白表达明显升高((P<0.05或P<0.01)。综上所述,热应激会使肉鸡出现精神萎靡、张口呼吸和饮水增多等行为学改变;肉鸡血清HSP70、HSP90和CORT水平升高,这表明肉鸡机体确已产生热应激。并且热应激会使肉鸡胸腺和脾脏萎缩、内部结构损伤、产生炎症反应以及免疫应答,并对胸腺的损伤更为严重。表明热应激对肉鸡的中枢免疫的影响可能更大。热应激后肉鸡血清、胸腺和脾脏脂质过氧化物增多、抗氧化能力降低和ROS增多,表明热应激会导致肉鸡产生氧化应激。热应激可通过提高肉鸡胸腺和脾脏ABCG2和SVCT-2表达量减轻氧化应激损伤,随着热应激时间的延长,对脾脏有更强的保护作用。热应激通过增加胸腺和脾脏的MCU的表达,导致线粒体钙超载,降低MMP和ATP水平,刺激ROS生成,引起细胞凋亡或坏死,从而影响肉鸡免疫功能。