中草药植物内生放线菌及其内源性质粒的研究

来源 :中科院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a370298894
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实验从中国传统药用植物中分离内生放线菌,共分离到 400 多株内生放线菌,经鉴定它们属于链霉菌属、诺卡氏菌属,拟诺卡氏菌属,分枝杆菌属等。内生菌在不同植物根茎叶中的比例不同,一些内生菌对宿主植物具有器官特异性。检测内生菌的生物学活性,发现 50.7%的菌株对人类常见病原细菌(芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)有抑制活性,11.0%的内生菌对白色念珠菌有抑制活性。从提取抗肿瘤药物——紫杉醇的红豆杉植物中分离到许多内生放线菌,通过 HPLC、MTT 实验,发现一些内生放线菌的提取物对肿瘤细胞有抑制活性,表明内生菌与药用植物之间存在密切的共进化关系,内生菌的生物学活性与宿主药用功能之间存在着密切联系。 实验采用脉冲电泳技术和普通DNA提取方法分离药用植物内生放线菌的内源性质粒,共发现 65 个内源性线型和环型质粒。在拟诺卡氏菌属中首次分离到一个 25kb 线型质粒,这个线型质粒被克隆并且测序,序列分析发现这个质粒上含有新奇的端粒序列和复制位点。克隆这个质粒的两个端粒,发现他们是相同的并且反向重复。这个线型质粒及其两个端粒被克隆到 psp72 vector 上,这个重组质粒在分枝杆菌中显示出很高的转化效率。实验发现重组质粒在链霉菌中不能复制,通过电转化拟诺卡氏菌属鉴定它最小功能的复制区。 从水稻内生菌中分离到很多内源质粒。在一株具有抗菌活性的链霉菌中分离到一个 60kb 线型质粒,这个质粒的被完全测序,序列分析发现这个质粒具有在不同链霉菌之间进行转移的特点。克隆了该质粒的最小功能端粒和基本复制区。这个质粒的环型复制方式与 Streptomyceslividans 中质粒 SLP2 很相似,它的有效复制要求 rep,iteron 以及iteron 上游的一段序列。
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