【摘 要】
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目的:急性肺损伤（acute lung injury,ALI）在肺炎、脓毒症等状况下最常发生,是危重病人呼吸衰竭的常见原因,患者死亡率高达30-40%。肺泡上皮主要由肺泡上皮I型（alveolar epithelial type I,ATI）和II型（alveolar epithelial type II,ATII）细胞构成,ATII细胞损伤已被证明会影响呼吸系统的液体转运平衡。上皮钠通道（epi
【基金项目】
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国家自然科学基金（NO.81670010）； 辽宁省重点研发计划指导计划项目（NO.2018225077）；
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目的:急性肺损伤（acute lung injury,ALI）在肺炎、脓毒症等状况下最常发生,是危重病人呼吸衰竭的常见原因,患者死亡率高达30-40%。肺泡上皮主要由肺泡上皮I型（alveolar epithelial type I,ATI）和II型（alveolar epithelial type II,ATII）细胞构成,ATII细胞损伤已被证明会影响呼吸系统的液体转运平衡。上皮钠通道（epithelial sodium channel,ENa C）在ATII细胞有分布,对维持钠离子的跨膜转运至关重要。炎症常伴随ALI出现,若得到缓解则可改善患者病情。木犀草素（luteolin,Lut）可抗氧化、抗炎和抗水肿,先前本课题组已对Lut调节ENa C进行了初步探索,本课题研究旨在基于三维（three-dimension,3D）肺泡上皮类器官模型进一步探讨Lut通过调节ENa C缓解上皮钠离子转运对ALI的影响。研究方法:1、通过测定小鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中总蛋白、肺湿干重比（wet-dry weight ratio,W/D）以及观察小鼠肺外观、HE染色切片判断Lut对小鼠ALI中肺水肿严重程度的影响。2、使用ELISA法研究Lut对小鼠BALF中白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（tumornecrosis factor,TNF）-α表达水平的调节作用。3、以原代ATII细胞为受试对象,应用Western Blot和q RT-PCR探究Lut对ENa C蛋白、m RNA表达的影响以及应用q RT-PCR探究对相关炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的转录调控作用。4、小鼠ATII细胞经磁珠分选纯化后,经台盼蓝染色法测定细胞活性及流式分析测定纯度,然后与MLg细胞在基质胶中进行共培养,共聚焦断层扫描成像及HE染色确认类器官模型建立。5、基于3D肺泡上皮类器官模型,应用免疫荧光和q RT-PCR进一步确证Lut对ENa C蛋白、m RNA表达的影响。结果:1、Lut能降低肺泡腔内总蛋白浓度及W/D,改善小鼠肺水肿后点状出血及肺泡腔内液体成分渗出。2、Lut处理使BALF中IL-1β、IL-6及TNF-α表达减少。3、Lut上调原代ATII细胞中α/γ-ENa C蛋白、α/β/γ-ENa C m RNA表达,可降低细胞中炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的m RNA表达。4、纯化后小鼠ATII细胞与MLg细胞共培养12 d后,经共聚焦断层扫描成像确认可表达ATI细胞标志物和ATII细胞标志物,HE染色结果显示形成类单层肺泡上皮细胞结构,确证3D肺泡上皮类器官模型建成。5、在3D肺泡上皮类器官模型上进一步验证了Lut上调α/γ-ENa C蛋白、α/β/γ-ENa C m RNA表达。结论:基于3D肺泡上皮类器官模型,Lut可通过上调ENa C表达从而改善上皮钠离子转运以缓解肺水肿,同时Lut可缓解炎症反应,为治疗ALI提供一种潜在的治疗策略。
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