毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一。该系统操控简单、经济,表达量高,具有翻译后修饰的能力,不存在原核表达系统内毒素难以去除的问题,也不存在哺乳动物细胞表达系统的病毒和支原体污染问题。目前已有多种外源蛋白在该系统中成功表达。我们利用该系统表达了几种重组蛋白。 1.复合干扰素突变体 根据毕赤酵母密码子偏性合成了复合干扰素突变体基因,构建了分泌型酵母表达载体,线性化后转化GS115。在发酵罐中进行了高密度发酵,表达量为112mg/L,发酵上清经超滤、三步层析纯化获得纯度大于98%的重组蛋白,比活性大于6×10~8IU/mg。 2.人干扰素-β1a 合成了人IFN-β1a基因,构建了酵母表达载体,线性化后转化GS115。甲醇诱导转化子,细胞病变抑制法测定诱导上清的抗病毒活性,培养上清中的表达量为2×10~5IU/mL。 3.组织型纤溶酶原激活剂衍生物rPAm 构建了rPAm的酵母表达载体,并在毕赤酵母分泌表达,培养上清中的表达量为1.6mg/L。 4.Thr6-PDGF-BB 构建了Thr6-PDGF-BB的酵母表达载体,筛选了高表达克隆,并在发酵罐中进行了高密度发酵,表达量为320mg/L。探索并优化了纯化工艺,获得纯度大于99%的重组Thr6-PDGF-BB。