博落回是重要的药用植物,有研究发现博落回中的一些苄基异喹啉类生物碱(BIAs)成分具有显著的生物活性,如血根碱(SAN),白屈菜红碱(CHE),小檗碱(BBR),原阿片碱(PRO)和别隐品碱(ALL)。目前可利用分子生物学、基因工程等手段对SAN生源合成途径中的关键基因进行过表达来提高博落回中生物碱含量,原阿片碱-6’-羟化酶(P6H)可将原阿片碱催化生成二氢血根碱,最终生成血根碱。本试验取得以下结果:1.根据博落回中原阿片碱-6’-羟化酶(P6H)基因序列设计P6H特异引物,使用分子生物技术克隆P6H基因。2.将克隆的P6H基因整合到植物载体pCAMBIA2301D中,用于转基因实验。3.成功将植物表达载体2301-P6H导入农杆菌GV3101中,经PCR鉴定和GUS鉴定,获得阳性植株。4.通过超高效液相色谱串联三重四级杆质谱仪(UPLC-QQQ MS)检测比较过表达P6H基因的阳性植株和野生型植株根、茎和叶三个不同部位的材料的苄基异喹啉生物碱含量。阳性植株的根、茎和叶三部分的PRO、二氢血根碱和SAN与野生型博落回植株相比均有提高,约提高了2-3倍。5.通过实时荧光定量PCR分析比较转入目的基因P6H的阳性植株和野生型植株的根、茎和叶三个不同部位的材料的基因相对表达量,发现博落回阳性植株的根、茎、叶中的P6H基因相对表达量有明显提高,其中在阳性植株根中的相对表达量是野生型植株的6.27倍;转入P6H基因后,下游的DBOX基因相对表达量也有明显提高,其中在阳性植株根中的相对表达量是野生型植株的12.73倍。