苎麻生物脱胶共生菌群RAMCD407群落结构初步分析

来源 :武汉纺织大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:wuyouan321
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苎麻作为我国特有的传统纺织材料,脱胶是苎麻纺纱的必经工艺。传统化学方法脱胶污染重、能耗高,生物脱胶反应条件温和,污染轻,能耗低,是纺织行业急需的清洁生产技术。然而,由于目前所使用的生物脱胶菌种脱胶能力不足和脱胶条件过于苛刻,限制了生物脱胶技术的工业应用,需要筛选补充新的脱胶菌种或尝试新的微生物利用方式。弄清自然或人工脱胶环境中可利用的脱胶微生物资源状况,以及自然的微生物脱胶方式,是开发利用新的脱胶菌种或间接利用脱胶微生物中有用基因资源的前提和基础。
  本文从不同沤麻或腐烂麻生境中筛选,人工驯化得到混合脱胶菌群RAMCD407。采用了PCR-DGGE(polymerasechainreactionanddenaturinggradientgelelectrophoresis,PCR-DGGE)技术,结合传统的平板分离培养,对苎麻生物脱胶共生菌群进行微生物菌群分析。
  实验采用基础培养基、苎麻粉培养基、苎麻发酵物培养基对菌株进行分离纯化,分别得到12株、10株、10株纯培养菌种。经生化与分子鉴定,结果与6个菌属同源性较高,分别为丛毛单胞菌属(Comamonassp.)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、沙雷氏菌属(SerratiaBizio)、肠球菌属(Enterococcus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、浸麻芽孢杆菌(Bacillusmacerans)。
  采用PCR-DGGE法分析菌群群落结构时,对实验体系进行了探索与优化。实验最终采用冻融-蛋白酶K-SDS法提取菌株总DNA。优化后的DGGE体系为变性剂梯度30%-60%,凝胶浓度8.0%,温度60℃,120V电泳约9.5h。在优化的电泳条件下,选择已分离的纯培养菌株和混合菌群,建立了它们的DGGE指纹图谱,并进行了条带的回收测序,为进一步的脱胶研究提供依据。
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