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背景肾间质纤维化(Renal interstitial fibrosis,RIF)属中医“水肿”、“虚劳”、“腰痛”、“尿浊”、“癃闭”、“关格”等证范畴。病程长,而诊治困难。在长期的临床观察与治疗中,传统中医形成了独特的中医病机学说,用于指导肾间质纤维化的中医药治疗,效果确切。而随着现代自然科学技术的发展,在病机理论指导下的肾间质纤维化诊断和检测也必将得到发展和推广。目的对中医“清浊”理论及“清浊相干”病机与肾间质纤维化的关系作一梳理,在中医“清浊相干”理论指导下研究肾间质纤维化尿外泌体源RNA的液体活检指标,进一步阐释与丰富“清浊相干”理论内涵及物质基础,为监测和指导“升清降浊法”的治疗措施提供实验室检测依据。方法1.理论研究:对史籍及现有文献“清浊”及“清浊相干”认识进行探究,分析“清浊相干”与肾间质纤维化及尿外泌体之间的关系。2.在“清浊相干”病机理论指导下进行实验研究,包括(1)实验技术的建立:以聚乙二醇沉淀剂富集尿外泌体,经电镜和Western blot验证后,qRT-PCR检测miRNA内参基因U6和mRNA内参基因β-actin,确立研究的基本技术。(2)以聚乙二醇沉淀剂富集尿外泌体,经鉴定后,qRT-PCR检测肾间质纤维化患者尿外泌体源miR-29c、miR-21、E-cadherin和vimentin。结果1.清浊是《内经》元概念,含义丰富,在人体的物质代谢中“清”是指“精微”,包括营养物质、氧气、水份等,对人体的活动有益的物质;“浊”即“废物”、“糟粕”,是指在代谢运动的某一阶段(或代谢过程中)多余的,体内不需要的物质。分清泌浊是健康个体正常生理表现,而“清浊相干”,表示清浊的紊乱,则属于疾病状态下的病理表现。上皮间质转化是肾间质纤维化形成重要机制之一,其转化过程中,肾小管上皮源或促上皮转化标志物(E-cadherin,miR-29c)与间质源或促间质转化标志物(vimentin,miR-21)表达的紊乱与“清浊相干”病机有类似之处。2.以一定浓度的聚乙二醇沉淀剂可成功富集尿外泌体,其纯度可用于后续的蛋白、核酸检测,实验操作简单、价格便宜,为后续液体活检指标的开发奠定基础。3.对肾间质纤维化患者尿外泌体及荷载RNA的检测证实尿外泌体源E-cadherin,miR-29c和vimentin,miR-21均发生一定程度的改变(或紊乱),提示尿外泌体源E-cadherin,miR-29c和vimentin,miR-21符合肾间质纤维化“清浊相干”理论。4.尿外泌体源miR-29c在肾间质纤维化患者尿外泌体中稳定降低,且随纤维化程度加重有降低更明显的趋势,并与估计肾小球滤过率、血尿素、肌酐及胱抑素c相关,诊断价值高,同时也提示其是一个相对较稳定的反应肾间质纤维化“清浊相干”程度的指标。结论对肾间质纤维化具有促进/不利作用的miR-21和vimentin在尿外泌体中具有增高趋势,对肾间质纤维化具有抑制/有利作用的miR-29c和E-cadherin在尿外泌体中具有降低的趋势,与肾间质纤维化“清浊相干”病机一致,可在一定程度反应“清浊相干”的分子机制。其中miR-29c在尿外泌体中稳定表达,且随纤维化程度加重而降低更明显,诊断价值高,也是相对稳定的“清浊相干”液体活检指标。