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背景帕金森病(parkinson’s disease, PD)是第二常见的神经系统退行性疾病,发病率仅次于阿尔茨海默病,在65岁以上人群发病率约为1%。PD的主要病理改变为黑质多巴胺能神经元的进行性变性缺失和路易小体的形成。目前研究发现90%以上PD患者为散发病例,少部分患者是基因突变导致。parkin是PD最常见的常染色体隐性遗传致病基因,在家族性常染色体隐性遗传早发帕金森病(发病年龄<45岁)中的突变频率为50%,在散发早发帕金森病(发病年龄<45岁)中的突变频率为15%。目前,已在各种族人群中发现parkin的很多突变形式,包括点突变、小片段缺失或插入以及基因重排突变(如外显子缺失、双重或多重突变)。基因重排是parkin一种常见的突变形式,50%的parkin基因改变为重排突变。重排突变若以杂合形式存在,运用常规的PCR-DNA测序并不能检测出,因此,为了准确的检测parkin的突变,DNA测序和外显子剂量分析均是必需的。多重连接探针扩增技术((?)nultiple ligation-dependent probe amplification,MLPA)是一种简单、快速、高效、敏感的基因筛查技术,可用于检测外显子的剂量改变和特定基因的特定位点的改变。建立MLPA的诊断技术有利于为临床诊断提供一种快速、高效的实验室诊断方法。目的1.构建parkin基因MLPA检测试剂盒；2.对中国散发帕金森病(sporadic parkinson disease,SPD)患者进行parkin基因重排突变分析,完善帕金森病的基因诊断平台。方法1.根据MLPA探针设计原则设计parkin外显子探针并构建MLPA试剂盒；2.与本研究小组前期应用实时荧光定量PCR技术检测的散发病例结果比较,验证试剂盒检测结果的准确性;3.运用设计的试剂盒对中国SPD患者parkin基因进行重排突变检测,并行实时荧光定量PCR进一步验证阳性结果。结果1.经过验证确立了各探针的最佳浓度,检验了探针的稳定性及可靠性,成功建立了parkin基因MLPA试剂盒；2.与78例本研究小组前期运用荧光定量PCR检测的散发病例相比较,发现76例结果相同,2例结果不同,均为假阴性,且均是未检测出外显子杂合重复；3.应用设计的MLPA试剂盒对755例散发PD患者进行检测,阳性结果再行实时荧光定量PCR验证,发现25例患者携带parkin基因的重排突变,突变频率为3.3%。其中男性18例,女性7例,发病年龄波动在14～72岁之间；其中早发病例176例(发病年龄≤45岁),携带parkin重排突变患者20例,突变频率为11.4%；晚发病例(发病年龄>45岁)579例,携带parkin重排突变患者5例,突变频率为0.86%。其中18例为单个外显子重排突变,其中,1例为单个外显子的杂合重复,2例单个外显子纯合缺失,7例为外显子的多重缺失突变,其中,1例为外显子2、3的多重杂合缺失,1例为外显子2、4的多重杂合缺失,1例为外显子2、3、4、5、6的多重杂合缺失,1例为外显子4、5、6、7的多重杂合缺失,1例为外显子3、4的多重纯合缺失,1例为外显子11、12的多重杂合缺失,1例为外显子1、2、3、4、5的多重杂合缺失。其中以多重杂合缺失为主要表现形式。结论1.成功构建了parkin基因MLPA试剂盒；2.成功运用设计的MLPA试剂盒对SPD患者进行了parkin基因的重排突变检测,发现突变频率为3.3%；3.发现发病年龄越早,基因突变可能性越大；4.发现外显子缺失突变可能是parkin的主要重排突变方式；5.parkin外显子2～4可能为基因重排突变的热点区域。