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目的：本课题拟对秦皮的质量控制以及抗肿瘤活性开展研究，一方面运用一标多测法对秦皮总香豆素含量进行测定，建立了基于秦皮多成分定量分析整体质量控制方法，同时对秦皮中成分及其类似物针对新的抗肿瘤靶标开展活性研究。
方法：本课题以白蜡树皮为目标进行供试品溶液提取方法考察和色谱条件考察。采用一标多测法对白蜡树皮进行多成分定量分析研究，以秦皮甲素Esculin为对照品，选择3个指标性成分，分别计算其校正因子，利用校正因子进行含量计算。最后采用一标多测法测定17批白蜡树皮中总香豆素的含量，建立验收标准，构建秦皮整体质量控制标准。
在建立了秦皮质量控制的基础上，我们对秦皮中主要香豆素及黄酮类成分，开展了抗肿瘤新靶标的活性研究，发现黄酮类物质对新靶标有一定的抑制作用，进一步拓展结构，发现黄酮类似物查耳酮具有更强的抑制活性，尤其是长春花中提取的119化合物对非小细胞肺癌A549新靶标具有抑制作用。但是查耳酮类化合物在植物中含量较低，为了有效地得到查耳酮类化合物，我们建立了在PPh3/I2作用下的苯乙酮和苯甲醛的缩合反应得到查耳酮类化合物。
结果：1）优化后的供试品制备方法为：准确称量500 mg秦皮粉末，置于100 mL圆底烧瓶中，加入提取溶剂25 mL（乙醇∶水=75∶25，v/v），回流加热，提取时间为90 min，提取1次。冷却，补足失重，摇匀，离心，用0.45μm微孔滤膜进行滤过，取续滤液，即得。当进样量为2μL时，溶剂效应不明显。当进样量为5μL时，色谱图中溶剂效应较为明显。因此在制备供试品溶液之后增加了用水稀释的步骤。最后准确地将1 mL滤液转移至2 mL容量瓶中，用水调节至体积，混合。2）优化后的色谱条件为：紫外波长334nm；色谱柱为Agilent ZORBAX SB C18(4.6×100mm,3.5μm)；流动相系统为甲醇-0.1%H3PO4溶液；流动相酸度为0.1%的磷酸水溶液；流动相中甲醇比例为17%，梯度如下（0-10 min，17%-17%甲醇；10-20min，17%-50%甲醇）；流速为1.5 mL/min；柱温为35℃；进样量为5μL时，达到最佳色谱分离条件。3）采用该SSDMC法测定17批白蜡树皮中总香豆素的含量，建立验收标准，其中总香豆素含量达到2.50%为合格标准。结果显示，13批白蜡树皮的总香豆素含量达到要求，合格率为76.5%。通过计算SSDMC/ESM的值表明两种方法之间没有显著性差异。
通过对119化合物的结构分析和结构改造，将合成并分离纯化得到的16个119类似物进行抗非小细胞肺癌A549活性评价体外活性筛选，得到抗肿瘤活性提高的化合物。体外活性评价结果显示，新合成的化合物具有较好的抑制活性。以苯乙酮和苯甲醛作为模型反应，以PPh3/I2为催化剂，以MeCN为溶剂，在温度80℃下合成了目标化合物查耳酮，产率为26%，证明了该方法的可行性。接下来通过筛选反应条件，探讨了溶剂，催化剂的量和反应温度等条件对反应产率的影响，总结出最优化的反应条件：在1，4-二氧六环为溶剂，PPh3/I2为1.0 equiv，在回流条件下发生反应，产率为60%。另外，我们还考察了在不加PPh3/I2催化剂的情况下，以1，4-二氧六环为溶剂，在回流条件下发生反应，结果发现期望产物查耳酮的产率仅为20%。
结论：本课题采用一标多测法进行秦皮总香豆素含量计算，建立秦皮的多成分定量分析方法，并构建秦皮整体质量控制体系。将建立的一标多测法应用于17批白蜡树皮含量测定，通过SSDMC/ESM的值表明两种方法之间没有显著性差异。说明采用该SSDMC方法对秦皮进行多成分定量分析是切实可行的。同时，建立验收标准，总香豆素含量达到2.50%为合格标准。该方法可以为相近中药的统一整体质量控制体系建立提供示范性研究。
通过系统的条件优化，建立了一种PPh3/I2作用下的苯乙酮和苯甲醛的缩合反应的方法，我们首次报道这种合成方法，可以避免苯乙酮和苯甲醛在强碱条件下的缩合，对常见化学基团，具有良好的耐受性。同时，对一系列的查耳酮化合物进行新靶标的抑制作用进行评价发现了多个活性显著提高的化合物。
方法：本课题以白蜡树皮为目标进行供试品溶液提取方法考察和色谱条件考察。采用一标多测法对白蜡树皮进行多成分定量分析研究，以秦皮甲素Esculin为对照品，选择3个指标性成分，分别计算其校正因子，利用校正因子进行含量计算。最后采用一标多测法测定17批白蜡树皮中总香豆素的含量，建立验收标准，构建秦皮整体质量控制标准。
在建立了秦皮质量控制的基础上，我们对秦皮中主要香豆素及黄酮类成分，开展了抗肿瘤新靶标的活性研究，发现黄酮类物质对新靶标有一定的抑制作用，进一步拓展结构，发现黄酮类似物查耳酮具有更强的抑制活性，尤其是长春花中提取的119化合物对非小细胞肺癌A549新靶标具有抑制作用。但是查耳酮类化合物在植物中含量较低，为了有效地得到查耳酮类化合物，我们建立了在PPh3/I2作用下的苯乙酮和苯甲醛的缩合反应得到查耳酮类化合物。
结果：1）优化后的供试品制备方法为：准确称量500 mg秦皮粉末，置于100 mL圆底烧瓶中，加入提取溶剂25 mL（乙醇∶水=75∶25，v/v），回流加热，提取时间为90 min，提取1次。冷却，补足失重，摇匀，离心，用0.45μm微孔滤膜进行滤过，取续滤液，即得。当进样量为2μL时，溶剂效应不明显。当进样量为5μL时，色谱图中溶剂效应较为明显。因此在制备供试品溶液之后增加了用水稀释的步骤。最后准确地将1 mL滤液转移至2 mL容量瓶中，用水调节至体积，混合。2）优化后的色谱条件为：紫外波长334nm；色谱柱为Agilent ZORBAX SB C18(4.6×100mm,3.5μm)；流动相系统为甲醇-0.1%H3PO4溶液；流动相酸度为0.1%的磷酸水溶液；流动相中甲醇比例为17%，梯度如下（0-10 min，17%-17%甲醇；10-20min，17%-50%甲醇）；流速为1.5 mL/min；柱温为35℃；进样量为5μL时，达到最佳色谱分离条件。3）采用该SSDMC法测定17批白蜡树皮中总香豆素的含量，建立验收标准，其中总香豆素含量达到2.50%为合格标准。结果显示，13批白蜡树皮的总香豆素含量达到要求，合格率为76.5%。通过计算SSDMC/ESM的值表明两种方法之间没有显著性差异。
通过对119化合物的结构分析和结构改造，将合成并分离纯化得到的16个119类似物进行抗非小细胞肺癌A549活性评价体外活性筛选，得到抗肿瘤活性提高的化合物。体外活性评价结果显示，新合成的化合物具有较好的抑制活性。以苯乙酮和苯甲醛作为模型反应，以PPh3/I2为催化剂，以MeCN为溶剂，在温度80℃下合成了目标化合物查耳酮，产率为26%，证明了该方法的可行性。接下来通过筛选反应条件，探讨了溶剂，催化剂的量和反应温度等条件对反应产率的影响，总结出最优化的反应条件：在1，4-二氧六环为溶剂，PPh3/I2为1.0 equiv，在回流条件下发生反应，产率为60%。另外，我们还考察了在不加PPh3/I2催化剂的情况下，以1，4-二氧六环为溶剂，在回流条件下发生反应，结果发现期望产物查耳酮的产率仅为20%。
结论：本课题采用一标多测法进行秦皮总香豆素含量计算，建立秦皮的多成分定量分析方法，并构建秦皮整体质量控制体系。将建立的一标多测法应用于17批白蜡树皮含量测定，通过SSDMC/ESM的值表明两种方法之间没有显著性差异。说明采用该SSDMC方法对秦皮进行多成分定量分析是切实可行的。同时，建立验收标准，总香豆素含量达到2.50%为合格标准。该方法可以为相近中药的统一整体质量控制体系建立提供示范性研究。
通过系统的条件优化，建立了一种PPh3/I2作用下的苯乙酮和苯甲醛的缩合反应的方法，我们首次报道这种合成方法，可以避免苯乙酮和苯甲醛在强碱条件下的缩合，对常见化学基团，具有良好的耐受性。同时，对一系列的查耳酮化合物进行新靶标的抑制作用进行评价发现了多个活性显著提高的化合物。