活性氧自由基由细胞代谢产生,并在细胞凋亡、基因表达和离子运输中扮演重要角色。过多活性氧自由基易与核酸、蛋白质的氨基酸侧链和不饱和脂肪酸的碳链发生不良化学反应,并引起细胞氧化损伤。已有研究证实麦胚肽具有一定的抗氧化活性,但目前文献报道大多集中在基于化学方法的体外抗氧化活性检测或简单的动物实验方面,在细胞、生物体内分子水平层次的研究报道不多。本课题前期研究发现麦胚肽RVF（Arg-Val-Phe）有较强的抗氧化效果,并已从体外抗氧化活性检测、细胞内总抗氧化能力与丙二醛含量等抗氧化指标检测、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路蛋白磷酸化激活与细胞线粒体凋亡通路上下游效应因子的表达等方面考察了RVF的抗氧化机制。本研究拟分别采用饥饿细胞模型和H₂O₂诱导的细胞氧化损伤模型,从细胞内活性氧水平、抗氧化酶活力、小分子抗氧化剂谷胱甘肽含量以及蛋白质损伤和细胞NF-κB凋亡通路等方面,更深入地探讨RVF对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的抗氧化机制,为其在缓解氧化应激、预防神经退行性疾病等领域的应用提供重要的理论依据,也为麦胚蛋白的综合利用提供新的思路。论文以人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y为实验载体,首先考察了麦胚抗氧化肽RVF对饥饿细胞模型和H₂O₂诱导的氧化损伤模型的的保护效果。在饥饿细胞模型40个不同浓度与作用时间的RVF组别中对SH-SY5Y细胞具有显著营养功能的只有2个组别,但此模型不具有剂量与时间依赖性;确定200μmol/L H₂O₂作用SH-SY5Y细胞12 h作为氧化损伤细胞模型的建模条件、200μmol/LRVF预孵育12 h作为模型保护条件;细胞形态检测结果表明经RVF干预后SH-SY5Y细胞逐渐由皱缩、细长恢复到梭形或多角形,且细胞数目也逐渐增多、粘附性增强,说明RVF对H₂O₂导致的SH-SY5Y细胞氧化应激具有抑制作用。为考察RVF对H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞内活性氧水平、抗氧化酶活力、谷胱甘肽含量以及蛋白质损伤的影响,本研究通过流式细胞术（flow cytometry）考察了SH-SY5Y细胞内超氧阴离子(O₂^-·)含量,采用酶标仪分别考察了细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力、还原型/氧化型谷胱甘肽（GSH/GSSG）比率以及蛋白糖基化水平。结果显示,200μmol/L RVF可将细胞内O₂^-·降低30.09%（p<0.01）、蛋白羰基化水平从11.16nmol/mg protein降至9.13 nmol/mg protein（p<0.05）;而细胞内SOD活力和GSH/GSSG比率则分别提升了37.72 U/mg protein（p<0.01）和2.987倍（p<0.01）。为考察RVF对H₂O₂诱导的SH-SY5Y凋亡细胞中DNA损伤的影响,本研究采用TUNEL/hochest 33342双染法检测了SH-SY5Y细胞DNA损伤率,结果表明200μmol/L RVF将细胞DNA损伤率降低了24.47%（p<0.01）,说明RVF有效缓解了H₂O₂诱导的细胞凋亡。为进一步探索RVF通过何种细胞凋亡信号通路起到抗凋亡作用,本研究采用Western blot和EMSA考察了RVF对H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞NF-κB通路激活的影响,结果显示,200μmol/L H₂O₂可使IκBα蛋白在Ser32位点处磷酸化并降解,致使下游p65蛋白入核,并与目的基因结合;而200μmol/L RVF通过降低IκBα蛋白的磷酸化（从0.54倍降低至0.21倍（p<0.01））,并具有剂量依赖性,进而抑制p65的入核表达。为考察RVF对H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞NF-κB通路介导的p53促凋亡蛋白、p53调节的Bax促凋亡蛋白、Bax介导的线粒体凋亡通路下游蛋白Caspase-3,9的剪切活化、XIAP抗凋亡蛋白以及p53同时介导的死亡受体通路中Caspase-8的剪切活化和抑制Caspase-8剪切的cFLIP抗凋亡蛋白等多种促凋亡或抗凋亡蛋白表达水平的影响,进一步采用Western blot考察了NF-κB通路促凋亡蛋白p53、Bax的表达情况,发现RVF将p53、Bax蛋白分别降低了1.76倍（p<0.01）和2.36倍（p<0.01）;采用RT-PCR考察了RVF对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞抗凋亡蛋白XIAP、cFLIP mRNA水平的表达情况,RVF将XIAP、cFLIP m RNA水平分别提升了0.32倍（p<0.01）和0.62倍（p<0.01）;采用Western Blot技术考察了细胞Caspase-3,8,9剪切活化情况,发现RVF将Caspase-3,8,9的蛋白剪切表达分别降低了1.6倍（p<0.01）、2.1倍（p<0.01）和4.3倍（p<0.01）。综上所述,麦胚抗氧化肽RVF可通过减少H₂O₂诱导的O₂^-·的生成,提升超氧化物歧化酶的活力和还原型谷胱甘肽的含量,并降低蛋白质羰基化的水平和DNA的损伤;通过抑制NF-κB通路的激活,减少p53蛋白及下游线粒体凋亡通路Bax蛋白的表达,进一步降低线粒体凋亡通路下游Caspase-3,9蛋白的剪切以及提升XIAP蛋白m RNA水平的表达,从而调控线粒体通路细胞凋亡;并且提升细胞凋亡死亡受体通路中cFLIP蛋白在m RNA水平的表达以及抑制Caspase-8蛋白的剪切活化,从而调控死亡受体诱导的细胞凋亡。